速來！師兄教你如何顯著提高凍存細(xì)胞復(fù)蘇成活率
發(fā)布時間：2025-01-13 瀏覽次數(shù)：297
一、提高凍存細(xì)胞復(fù)蘇成功率
1.使用適當(dāng)?shù)睦鋬霰Ｗo(hù)劑：常用的冷凍保護(hù)劑如二甲基亞砜（DMSO）能夠有效減少冰晶形成，保護(hù)細(xì)胞免受滲透壓變化的損害。
2.控制冷凍速率：堅持“慢凍快融”原則，使用梯度降溫盒或手動梯度降溫，將細(xì)胞以-1°C至-2°C/分鐘的速率降溫至-80°C，然后轉(zhuǎn)移至液氮中長期保存。
3.選用合適的冷凍容器：使用耐低溫的不易破裂的凍存管，確保其適合長期冷凍保存細(xì)胞。
4.細(xì)胞數(shù)量適量：凍存前避免細(xì)胞過度濃縮，以減小機(jī)械壓力。每個凍存管中的細(xì)胞數(shù)量不宜過少，便于復(fù)蘇到6cm皿或T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
5.記錄詳細(xì)信息：在凍存管上清晰標(biāo)記細(xì)胞類型、凍存日期和細(xì)胞密度，以便于稍后追蹤和使用。
6.避免反復(fù)凍融：凍存和復(fù)蘇過程中盡量避免反復(fù)凍結(jié)和解凍，以保持較高的細(xì)胞存活率。
7.復(fù)蘇時快速升溫：復(fù)蘇時，應(yīng)迅速將凍存管從液氮中取出，并在37°C水浴中快速解凍，減少細(xì)胞在冰點附近的停留時間。
8.使用恰當(dāng)?shù)膹?fù)蘇介質(zhì)：復(fù)蘇細(xì)胞時，應(yīng)使用與凍存時相同或相似的培養(yǎng)基，以維持細(xì)胞的生理狀態(tài)。
9.徹底去除凍存液：將解凍后的細(xì)胞用培養(yǎng)基稀釋，離心去除凍存液，然后用培養(yǎng)基重懸后繼續(xù)培養(yǎng)，以保護(hù)細(xì)胞并促進(jìn)其健康復(fù)蘇。
二、凍存細(xì)胞復(fù)蘇步驟
① 棄去細(xì)胞培養(yǎng)基并PBS洗滌：先棄去培養(yǎng)基，然后用PBS緩沖液洗滌細(xì)胞一遍，確保去除殘留培養(yǎng)基。
② 胰酶消化：消化時間不宜過長，當(dāng)觀察到部分細(xì)胞如流沙狀慢慢脫落時，可中止消化以避免過度影響細(xì)胞完整性。
③ 離心并重懸細(xì)胞：離心后，用移液槍吸去上清，然后用事先準(zhǔn)備好的凍存液重新懸浮細(xì)胞。
④ 凍存液配方：常用比例為DMSO:血清=12:7或1:9。確保凍存液能有效保護(hù)細(xì)胞。
⑤ 標(biāo)記凍存管：在凍存管上詳細(xì)標(biāo)記細(xì)胞系、使用的培養(yǎng)基、凍存者姓名以及年份和日期，以便將來檢索和使用。
⑥ 使用程序降溫盒：使用程序降溫盒以緩慢降溫，能提升細(xì)胞存活率。建議將細(xì)胞在-80℃下保存24小時后再轉(zhuǎn)移至液氮中進(jìn)行長期儲存。
文章來源：環(huán)凱（官網(wǎng)：huankai.com）轉(zhuǎn)載于“Dr實驗助手 ”公眾號；原作者~實驗軼。
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