科研干貨 | 養(yǎng)好THP-1細胞的關(guān)鍵
發(fā)布時間：2025-01-06 瀏覽次數(shù)：747
為了成功地培養(yǎng)THP-1細胞，以下是一些重要的注意事項：
首先，在培養(yǎng)基的配制上，建議使用1640培養(yǎng)基并加入10%血清或血清替代品，同時添加0.05mM的β-巰基乙醇。對THP-1細胞來說，血清質(zhì)量的選擇非常關(guān)鍵，因此要確保使用高質(zhì)量的血清或血清替代品，比如XR血清替代品，來提供細胞所需的營養(yǎng)和生長因子。 其次，在培養(yǎng)過程中要注意定期進行液體更換和細胞傳代。建議使用非TC處理的培養(yǎng)瓶，并避免頻繁的離心操作以減少機械損傷。在換液時，可以采用補液法或半換液法，同時注意維持適當?shù)募毎芏纫源龠M細胞生長。 對于細胞傳代，可以選擇直接分瓶或離心法，確保細胞均勻并且細胞密度適中。另外，凍存時應(yīng)使用預(yù)先配制的凍存液（例如DMSO）來保存細胞，并注意避免使用無血清凍存液，因為這可能導(dǎo)致細胞失活。 
最后，要特別注意添加β-巰基乙醇到培養(yǎng)基中，因為THP-1細胞對氧化敏感，而β-巰基乙醇可以保護細胞免受氧化應(yīng)激的損傷，有助于維持細胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定。綜合來看，選擇合適的培養(yǎng)基組分、培養(yǎng)條件和操作方法將有助于養(yǎng)好THP-1細胞并維持其良好的生長狀態(tài)。
1. 培養(yǎng)基準備
基礎(chǔ)培養(yǎng)基：使用RPMI 1640培養(yǎng)基，添加10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素-鏈霉素雙抗。 抗氧化劑：加入0.05mM β-巰基乙醇（β-mercaptoethanol），但由于其不穩(wěn)定性，建議在使用前新鮮配制。
2. 細胞密度
密度依賴性：THP-1細胞對密度非常敏感，建議保持在5×105到1×106細胞/mL之間。 傳代：當細胞密度超過1×106細胞/mL時，需要進行傳代。一般1:2傳代。
3. 培養(yǎng)條件
酸性環(huán)境：THP-1細胞在偏酸性環(huán)境中生長較好。當培養(yǎng)基變黃（橘紅色）時，可以補充新鮮培養(yǎng)基或進行半換液。 溫度和CO2：培養(yǎng)溫度保持在37°C，5% CO2環(huán)境中。
4. 凍存與復(fù)蘇
凍存：使用無血清凍存液，細胞密度控制在約5×106細胞/mL。復(fù)蘇時，150G離心3分鐘。 復(fù)蘇后處理：復(fù)蘇后48小時內(nèi)盡量不對細胞進行操作，以便細胞恢復(fù)。
5. 常見問題及解決
細胞聚團：這是正?，F(xiàn)象，無需吹散?？梢暂p輕晃動培養(yǎng)瓶或孔板，使細胞均勻分布。 小黑點：可能是污染或細胞碎片。建議更換培養(yǎng)基并觀察，如果持續(xù)出現(xiàn)，可能需要丟棄培養(yǎng)。
如何檢測THP-1細胞的分化狀態(tài)？
1. 形態(tài)學(xué)觀察
顯微鏡觀察：分化后的THP-1細胞會從懸浮狀態(tài)變?yōu)橘N壁狀態(tài)，細胞形態(tài)由圓形變?yōu)椴灰?guī)則形態(tài)，體積增大，細胞漿疏松，細胞核增大。
2. 表面標志物檢測
流式細胞術(shù)：使用流式細胞術(shù)檢測特定的表面標志物，如CD11b和CD14，這些標志物在分化為巨噬細胞后會顯著表達。 免疫熒光染色：通過免疫熒光染色檢測細胞表面和細胞內(nèi)的特定蛋白質(zhì)表達情況。
3. 功能性檢測
吞噬能力測試：分化后的巨噬細胞具有吞噬能力，可以通過吞噬熒光微珠或細菌來檢測其功能。 酶活性檢測：檢測分化后細胞的特定酶活性，如酸性磷酸酶活性。
4. 基因表達分析
qPCR：通過定量PCR檢測分化相關(guān)基因的表達水平，如TNF-α、IL-1β等。 Western Blot：檢測分化相關(guān)蛋白質(zhì)的表達水平。
注意事項
1.形態(tài)學(xué)觀察
顯微鏡觀察：分化后的THP-1細胞會從懸浮狀態(tài)變?yōu)橘N壁狀態(tài)，細胞形態(tài)由圓形變?yōu)椴灰?guī)則形態(tài)，體積增大，細胞漿疏松，細胞核增大。
2. 表面標志物檢測
流式細胞術(shù)：使用流式細胞術(shù)檢測特定的表面標志物，如CD11b和CD14，這些標志物在分化為巨噬細胞后會顯著表達。 免疫熒光染色：通過免疫熒光染色檢測細胞表面和細胞內(nèi)的特定蛋白質(zhì)表達情況。
3. 功能性檢測
吞噬能力測試：分化后的巨噬細胞具有吞噬能力，可以通過吞噬熒光微珠或細菌來檢測其功能。 酶活性檢測：檢測分化后細胞的特定酶活性，如酸性磷酸酶活性。
4. 基因表達分析
qPCR：通過定量PCR檢測分化相關(guān)基因的表達水平，如TNF-α、IL-1β等。 Western Blot：檢測分化相關(guān)蛋白質(zhì)的表達水平。
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