中國工程院食品安全院士團(tuán)隊(duì)

科研成果轉(zhuǎn)化平臺(tái)

為了成功地培養(yǎng)THP-1細(xì)胞，以下是一些重要的注意事項(xiàng)：

• 首先，在培養(yǎng)基的配制上，建議使用1640培養(yǎng)基并加入10%血清或血清替代品，同時(shí)添加0.05mM的β-巰基乙醇。對(duì)THP-1細(xì)胞來說，血清質(zhì)量的選擇非常關(guān)鍵，因此要確保使用高質(zhì)量的血清或血清替代品，比如XR血清替代品，來提供細(xì)胞所需的營養(yǎng)和生長(zhǎng)因子。
• 其次，在培養(yǎng)過程中要注意定期進(jìn)行液體更換和細(xì)胞傳代。建議使用非TC處理的培養(yǎng)瓶，并避免頻繁的離心操作以減少機(jī)械損傷。在換液時(shí)，可以采用補(bǔ)液法或半換液法，同時(shí)注意維持適當(dāng)?shù)募?xì)胞密度以促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)。
• 對(duì)于細(xì)胞傳代，可以選擇直接分瓶或離心法，確保細(xì)胞均勻并且細(xì)胞密度適中。另外，凍存時(shí)應(yīng)使用預(yù)先配制的凍存液（例如DMSO）來保存細(xì)胞，并注意避免使用無血清凍存液，因?yàn)檫@可能導(dǎo)致細(xì)胞失活。
  

• 最后，要特別注意添加β-巰基乙醇到培養(yǎng)基中，因?yàn)門HP-1細(xì)胞對(duì)氧化敏感，而β-巰基乙醇可以保護(hù)細(xì)胞免受氧化應(yīng)激的損傷，有助于維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定。綜合來看，選擇合適的培養(yǎng)基組分、培養(yǎng)條件和操作方法將有助于養(yǎng)好THP-1細(xì)胞并維持其良好的生長(zhǎng)狀態(tài)。

1. 培養(yǎng)基準(zhǔn)備

• 基礎(chǔ)培養(yǎng)基：使用RPMI 1640培養(yǎng)基，添加10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素-鏈霉素雙抗。

• 抗氧化劑：加入0.05mM β-巰基乙醇（β-mercaptoethanol），但由于其不穩(wěn)定性，建議在使用前新鮮配制。

2. 細(xì)胞密度

• 密度依賴性：THP-1細(xì)胞對(duì)密度非常敏感，建議保持在5×10⁵到1×10⁶細(xì)胞/mL之間。

• 傳代：當(dāng)細(xì)胞密度超過1×10⁶細(xì)胞/mL時(shí)，需要進(jìn)行傳代。一般1:2傳代。

3. 培養(yǎng)條件

• 酸性環(huán)境：THP-1細(xì)胞在偏酸性環(huán)境中生長(zhǎng)較好。當(dāng)培養(yǎng)基變黃（橘紅色）時(shí)，可以補(bǔ)充新鮮培養(yǎng)基或進(jìn)行半換液。

• 溫度和CO₂：培養(yǎng)溫度保持在37°C，5% CO₂環(huán)境中。

4. 凍存與復(fù)蘇

• 凍存：使用無血清凍存液，細(xì)胞密度控制在約5×10⁶細(xì)胞/mL。復(fù)蘇時(shí)，150G離心3分鐘。

• 復(fù)蘇后處理：復(fù)蘇后48小時(shí)內(nèi)盡量不對(duì)細(xì)胞進(jìn)行操作，以便細(xì)胞恢復(fù)。

  

5. 常見問題及解決

• 細(xì)胞聚團(tuán)：這是正?，F(xiàn)象，無需吹散?？梢暂p輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶或孔板，使細(xì)胞均勻分布。

• 小黑點(diǎn)：可能是污染或細(xì)胞碎片。建議更換培養(yǎng)基并觀察，如果持續(xù)出現(xiàn)，可能需要丟棄培養(yǎng)。

如何檢測(cè)THP-1細(xì)胞的分化狀態(tài)？

1. 形態(tài)學(xué)觀察

• 顯微鏡觀察：分化后的THP-1細(xì)胞會(huì)從懸浮狀態(tài)變?yōu)橘N壁狀態(tài)，細(xì)胞形態(tài)由圓形變?yōu)椴灰?guī)則形態(tài)，體積增大，細(xì)胞漿疏松，細(xì)胞核增大。

2. 表面標(biāo)志物檢測(cè)

• 流式細(xì)胞術(shù)：使用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)特定的表面標(biāo)志物，如CD11b和CD14，這些標(biāo)志物在分化為巨噬細(xì)胞后會(huì)顯著表達(dá)。

• 免疫熒光染色：通過免疫熒光染色檢測(cè)細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)的特定蛋白質(zhì)表達(dá)情況。

3. 功能性檢測(cè)

• 吞噬能力測(cè)試：分化后的巨噬細(xì)胞具有吞噬能力，可以通過吞噬熒光微珠或細(xì)菌來檢測(cè)其功能。

• 酶活性檢測(cè)：檢測(cè)分化后細(xì)胞的特定酶活性，如酸性磷酸酶活性。

4. 基因表達(dá)分析

• qPCR：通過定量PCR檢測(cè)分化相關(guān)基因的表達(dá)水平，如TNF-α、IL-1β等。

• Western Blot：檢測(cè)分化相關(guān)蛋白質(zhì)的表達(dá)水平。

  

注意事項(xiàng)

1.形態(tài)學(xué)觀察

• 顯微鏡觀察：分化后的THP-1細(xì)胞會(huì)從懸浮狀態(tài)變?yōu)橘N壁狀態(tài)，細(xì)胞形態(tài)由圓形變?yōu)椴灰?guī)則形態(tài)，體積增大，細(xì)胞漿疏松，細(xì)胞核增大。

2. 表面標(biāo)志物檢測(cè)

• 流式細(xì)胞術(shù)：使用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)特定的表面標(biāo)志物，如CD11b和CD14，這些標(biāo)志物在分化為巨噬細(xì)胞后會(huì)顯著表達(dá)。

• 免疫熒光染色：通過免疫熒光染色檢測(cè)細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)的特定蛋白質(zhì)表達(dá)情況。

3. 功能性檢測(cè)

• 吞噬能力測(cè)試：分化后的巨噬細(xì)胞具有吞噬能力，可以通過吞噬熒光微珠或細(xì)菌來檢測(cè)其功能。

• 酶活性檢測(cè)：檢測(cè)分化后細(xì)胞的特定酶活性，如酸性磷酸酶活性。

4. 基因表達(dá)分析

• qPCR：通過定量PCR檢測(cè)分化相關(guān)基因的表達(dá)水平，如TNF-α、IL-1β等。
• Western Blot：檢測(cè)分化相關(guān)蛋白質(zhì)的表達(dá)水平。

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