中國工程院食品安全院士團(tuán)隊(duì)

科研成果轉(zhuǎn)化平臺

　　024045 胰蛋白月示-亞硫酸鹽-瓊脂培養(yǎng)基

　　(Tryptose Sulfite Agar)

　　用 途：

　　用于城市供水中濾膜法測定亞硫酸鹽還原厭氧菌(梭狀芽孢桿菌)孢子。(中華人民共和國城鎮(zhèn)建設(shè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)CJ/T 149—2001)

　　原 理：

　　胰蛋白胨、大豆蛋白胨和酵母膏粉提供碳氮源、維生素和生長因子;焦亞硫酸鈉和檸檬酸鐵銨為硫化氫指示劑;梭狀芽孢桿菌將焦亞硫酸鈉還原為硫化氫，與鐵離子結(jié)果形成黑色沉淀。

　　培養(yǎng)基配方(每升)：

　　胰蛋白月示 15g

　　大豆蛋白胨 5g

　　酵母膏粉 5g

　　焦亞硫酸鈉(Na2S2O5) 1g

　　檸檬酸鐵銨 1g

　　瓊脂 15g

　　最終pH7.6±0.2

　　使用方法：

　　1、稱取本品42g，加入1000 mL蒸餾水或去離子水，攪拌加熱煮沸至完全溶解，分裝三角瓶，121℃滅菌15分鐘，待冷至50℃左右傾注平皿。

　　2、濾膜滅菌

　　將濾膜放入燒杯中，置于沸水中煮沸滅菌三次，每次15分鐘。前兩次煮沸后需要更換水洗滌2-3次，以除去殘留溶劑。

　　3、濾器滅菌

　　視濾器質(zhì)地采用干熱(酒精棉球火焰)或濕熱滅菌。

　　4、孢子的選擇

　　水樣在試驗(yàn)前須放置于水浴鍋中，75±1℃加熱15分鐘。用同樣的水樣瓶作空白，用溫度計(jì)檢查加熱溫度。

　　5、接種與培養(yǎng)

　　水樣的過濾量要適當(dāng)：對于飲用水、泉水、井水、海水、地面水和梭狀芽孢桿菌輕度污染的水，取100mL過濾;對污染嚴(yán)重的水或廢水，可用無菌水稀釋后檢測。調(diào)配一定的稀釋度，使在濾膜上生長的黑色菌落分離，而更易于計(jì)數(shù)。

　　水樣過濾后，用無菌鑷子將濾膜過濾面朝下，置于培養(yǎng)皿中，同時使濾膜下無氣泡。小心地將18mL約50℃的培養(yǎng)基傾注于培養(yǎng)皿中的膜上。在形成培養(yǎng)基層后，37±1℃培養(yǎng)20±4h和44±4h。如果使用厭氧培養(yǎng)箱，濾膜可放置在瓊脂面上，且濾膜面向上。

　　6、觀察結(jié)果。

　　培養(yǎng)20±4h和44±4h后，計(jì)數(shù)所有黑色菌落。

　　7、分析結(jié)果的表述

　　試驗(yàn)報告應(yīng)說明所使用的方法，單位體積水樣中亞硫酸鹽還原厭氧細(xì)菌培養(yǎng)44±4h的孢子;孢子數(shù)太多，黑色菌落連在一起而難以計(jì)數(shù)，可采用20±4h培養(yǎng)時間的孢子大約數(shù)目。結(jié)果以CFU/100mL計(jì)。

　　質(zhì)量控制：

　　質(zhì)控菌株接種后于37±1℃培養(yǎng)24—48h，結(jié)果如下：

　　貯 存：貯存于避光、陰涼干燥處，用后立即旋緊瓶蓋。貯存期三年。

　　規(guī) 格：250g

　　參考文獻(xiàn):

　　1. CJ/T 149—2001中華人民共和國城鎮(zhèn)建設(shè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) 城市供水水質(zhì)檢驗(yàn)方法