平板培養(yǎng)基含有細(xì)菌生長所需要的營養(yǎng)成分，當(dāng)取自不同來源的樣品接種于培養(yǎng)基上，在37℃溫度下培養(yǎng)，1~2天內(nèi)每一菌體即能通過很多次細(xì)胞分裂而進(jìn)行繁殖，形成一個(gè)可見的細(xì)胞群體的集落，稱為菌落。

　　每一種細(xì)菌所形成的菌落都有它自己的特點(diǎn)，例如菌落的大小，表面干燥或濕潤、隆起或扁平、粗糙或光滑，邊緣整齊或不整齊，菌落透明或半透明或不透明，顏色以及質(zhì)地疏松或緊密等。因此，可通過平板培養(yǎng)來檢查環(huán)境中細(xì)菌的數(shù)量和類型。

微生物檢測材料

微生物

試劑、試劑盒

　　肉膏蛋白胨瓊脂

儀器、耗材

　　滅菌棉簽　　接種環(huán)　　試管架　　酒精燈

實(shí)驗(yàn)步驟

1.寫標(biāo)簽

　　任何一個(gè)實(shí)驗(yàn)，在動(dòng)手操作前均需首先將器皿用記號筆做上記號，培養(yǎng)皿的記號一般寫在皿底上。如果寫在皿蓋上，同時(shí)觀察兩個(gè)以上培養(yǎng)皿的結(jié)果，打開皿蓋時(shí)，容易混淆。用記號筆寫上班級、姓名、日期，本次實(shí)驗(yàn)還要寫上樣品來源(如實(shí)驗(yàn)室空氣或無菌室空氣或頭發(fā)等)，字盡量小些，寫在皿底的一邊，不要寫在當(dāng)中，以免影響觀察結(jié)果。

2.實(shí)驗(yàn)室細(xì)菌檢查

　　(1)空氣將一個(gè)肉膏蛋白胨瓊脂平板放在當(dāng)時(shí)做實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室，移去皿蓋，使瓊脂培養(yǎng)基表面暴露在空氣中;將另一肉膏蛋白胨瓊脂平板放在無菌室或無人走動(dòng)的其他實(shí)驗(yàn)室，移去皿蓋。一小時(shí)后蓋上兩個(gè)皿蓋。

　　(2)實(shí)驗(yàn)臺(tái)和門的旋鈕

　?、儆糜浱柟P在皿底外面中央畫一直線，再在此線中間處畫一垂直線。

　　②取棉簽左手拿含有棉簽的試管，在火焰旁用右手的手掌邊緣和小指、無名指夾持棉塞(或試管帽)，將其取出，將管口很快地通過煤氣燈(或酒精燈)的火焰，燒灼管口;輕輕地傾斜試管，用右手的拇指和食指將棉簽小心地取出。放回棉塞(或試管帽)，并將空試管放在試管架上。

　?、叟獫衩藓炞笫秩缇嚬埽缟戏ò纬雒奕?或試管帽)并燒灼管口，將棉簽插入水中，再提出水面，在管壁上擠壓一下以除去過多的水分，小心將棉簽取出，燒灼管口，放回棉塞(或試管帽)，并將滅菌水試管放在試管架上。

　?、苋訉衩藓炘趯?shí)驗(yàn)臺(tái)面或門旋鈕上擦拭約2平方厘米的范圍。

　?、萁臃N，A在火焰旁用左手拇指和食指或中指使平皿開啟成一縫。再將棉簽伸入，在瓊脂表面頂端接種(滾動(dòng)一下)，立即閉合皿蓋。將原放棉簽的空試管拔出棉塞(或試管帽)，燒灼管口，插入用過的棉簽，將試管放回試管架。

　?、迍澗€另取接種環(huán)在火焰上滅菌，先將環(huán)端燒熱，然后將接種環(huán)提起垂直放在火焰上，以使火焰接觸金屬絲的范圍廣一些，待接種環(huán)燒紅，再將接種環(huán)斜放，沿環(huán)向上，燒至可能碰到培養(yǎng)皿的部分，再移向環(huán)端，如此很快地來回通過火焰數(shù)次。

　　左手拿起平板，同樣開啟一縫，將滅過菌并冷卻了的接種環(huán)(可在瓊脂表面邊緣空白處試溫度，若發(fā)出濺潑聲，表示太燙)，通過瓊脂頂端的接種區(qū)，向下劃線，直到平板的一半處。注意：接種環(huán)與瓊脂表面的角度要小，移動(dòng)的壓力不能太大，否則會(huì)刺破瓊脂。

　　閉合皿蓋，左手將平板向左轉(zhuǎn)動(dòng)至空白處，右手拿的接種環(huán)再在火焰上燒灼，使冷。接種環(huán)通過前面劃的線條再在瓊脂的另一半，從上向下來回劃線至1/2處。

　　燒灼接種環(huán)，轉(zhuǎn)動(dòng)平板，劃最后1/4，立刻蓋上皿蓋，燒灼接種環(huán)，放回原處。整個(gè)劃線操作均要求無菌操作，即靠近火焰，而且動(dòng)作要快。

3.人體細(xì)菌的檢查

　　(1)手指(洗手前與洗手后)

　?、俜謩e在兩個(gè)瓊脂平板上標(biāo)明洗手前與洗手后(當(dāng)然，班級、姓名、日期各項(xiàng)在每次寫標(biāo)簽時(shí)是必不可少的)。

　?、谝迫ッ笊w，將未洗過的手指在瓊脂平板的表面，輕輕地來回劃線，蓋上皿蓋。

　　③用肥皂和刷子，用力刷手，在流水中沖洗干凈，干燥后，在另一瓊脂平板表面來回移動(dòng)，蓋上皿蓋。

　　(2)頭發(fā)：在揭開皿蓋的瓊脂平板的上方，用手將頭發(fā)用力搖動(dòng)數(shù)次，使細(xì)菌降落到瓊脂平板表面，然后蓋上皿蓋。

　　(3)咳嗽：將去蓋瓊脂平板放在離口約6~8 cm 處，對著瓊脂表面用力咳嗽，然后蓋上皿蓋。

　　(4)鼻腔

　?、侔凑諏?shí)驗(yàn)臺(tái)檢查法的步驟②和③，取出棉簽，并將其弄濕。

　?、谟脻衩藓炘诒乔粌?nèi)滾動(dòng)數(shù)次。

　?、郯磳?shí)驗(yàn)臺(tái)檢查法的步驟④和⑤，接種與劃線，然后蓋上皿蓋。

4.將所有的瓊脂平板翻轉(zhuǎn)，使皿底在上，放37℃培養(yǎng)箱，培養(yǎng)1~2天。

5.結(jié)果分析

　　(1)菌落計(jì)數(shù)在劃線的平板上，如果菌落很多而重疊，則數(shù)平板最后1/4面積內(nèi)的菌落數(shù)。不是劃線的平板，也一分為四，數(shù)1/4面積的菌落數(shù)。

　　(2)根據(jù)菌落大小、形狀、高度、干濕等特征觀察不同的菌落類型。但要注意，如果細(xì)菌數(shù)量太多，會(huì)使很多菌落生長在一起，或者限制了菌落生長而變得很小，因而外觀不典型，故觀察菌落的特點(diǎn)時(shí)，要選擇分離得很開的單個(gè)菌落。

菌落特征描寫方法

　?、俅笮〈蟆⒅?、小、針尖狀?？上葘⒄麄€(gè)平板上的菌落粗略觀察一下，再?zèng)Q定大、中、小的標(biāo)準(zhǔn)，或由教師指出一個(gè)大小范圍。

　?、陬伾S色、金黃色、灰色、乳白色、紅色、粉紅色等。

　?、鄹蓾袂闆r干燥、濕潤、粘稠。

　?、苄螒B(tài)圓形、不規(guī)則等。

　?、莞叨缺馄健⒙∑?、凹下。

　?、尥该鞒潭韧该?、半透明、不透明。

　?、哌吘壵R、不整齊。