CCK-8的實(shí)驗(yàn)過程注意細(xì)節(jié)
發(fā)布時(shí)間：2023-03-17 瀏覽次數(shù)：458
普遍認(rèn)為，CCK-8是操作更簡單、數(shù)據(jù)更穩(wěn)定、靈敏度也較高的細(xì)胞增殖與毒性檢測方法。CCK-8實(shí)驗(yàn)過程簡單總結(jié)為配置細(xì)胞懸液、加入待測物質(zhì)、待測物質(zhì)與細(xì)胞共同孵育一定時(shí)間、加入CCK-8、測定吸光度五步。但其中仍有需要注意的地方，值得探討學(xué)習(xí)。
CCK-8的實(shí)驗(yàn)過程注意細(xì)節(jié)
01 配置細(xì)胞懸液
a. 如果是第一次做或者第一次種此類細(xì)胞，建議先做幾個(gè)孔去摸索接種數(shù)量和培養(yǎng)時(shí)間；
b. 細(xì)胞懸液一定要混合均勻，避免其沉淀導(dǎo)致每個(gè)孔的細(xì)胞數(shù)量不一樣。
建議在培育時(shí)間內(nèi)不要讓細(xì)胞長得太滿，其一無法判斷是否堆積生長會影響藥物進(jìn)入細(xì)胞進(jìn)而影響OD值，其二生長不均勻會導(dǎo)致孔間OD值偏差較大，影響最終結(jié)果。
02 加入CCK-8溶液后孵育的時(shí)間
孵育時(shí)間與細(xì)胞類型和種植細(xì)胞的密度是正相關(guān)的，建議設(shè)定一系列梯度時(shí)間分別進(jìn)行監(jiān)測，選取吸光度范圍比較適宜的時(shí)間點(diǎn)用于后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
此外，考慮到孵育過程每孔蒸發(fā)量不一樣，所以在加CCK-8時(shí)，可以將舊的培養(yǎng)基吸出，然后加入新鮮的培養(yǎng)基與CCK-8混勻液（100：10），再進(jìn)行檢測。
03 OD值的檢測
影響OD值的因素很多，比如細(xì)胞密度、孵育時(shí)間、檢測時(shí)孔里有氣泡等。
a. OD值過高可以適當(dāng)減少細(xì)胞數(shù)量和縮短共同孵育時(shí)間；
b. OD值過低則可以適當(dāng)增加細(xì)胞量與延長加入CCK-8試劑后的反應(yīng)時(shí)間。
建議將OD值控制在1.0左右附近，酶標(biāo)儀與UV的原理類似，都有一個(gè)最佳的檢測范圍超過了這個(gè)范圍數(shù)據(jù)就會不穩(wěn)定，因此為了避免讀數(shù)不準(zhǔn)確要根據(jù)自己的數(shù)據(jù)范圍設(shè)定具體的實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)。
來源：“金沙生物”公眾號
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