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CCK-8檢測原理、優(yōu)勢及注意事項大盤點

發(fā)布時間：2022-12-12    瀏覽次數：1104

CCK8是Cell Counting Kit-8縮寫，直譯為：細胞計數試劑。WST-8用于測定細胞增殖和毒性分析。

CCK-8檢測原理

WST-8在電子耦合試劑1-Methoxy PMS存在的情況下，可以被細胞線粒體內的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產物。顏色的深淺與細胞的增殖成正比，與細胞毒性成反比。使用酶標儀在450mM波長處測定OD值，間接反映活細胞數量。

檢測方法 MTT法XTT法WST-1法CCK-8法
甲臜產物的水溶性 差（需加有機溶劑溶解再檢測）好好好
產品形狀 粉末2瓶溶液溶液1瓶溶液
使用方法 配成溶液后使用現配現用即開即用即開即用
檢測靈敏度 高很高很高高
檢測時間 較長較短較短最短
檢測波長 560-600nm420-480nm420-480nm430-490nm
細胞毒性 高，細胞形態(tài)完全消失很低，細胞形態(tài)不變很低，細胞形態(tài)不變很低，細胞形態(tài)不變
試劑穩(wěn)定性 一般較差一般很好
批量樣品檢測 可以非常適合非常適合非常適合
便捷程度 一般便捷便捷非常便捷

表1 CCK法與其他細胞增殖/毒性檢測方法的優(yōu)勢比較


相比之下，CCK-8的甲臜產物水溶性好，無需現配現用，靈敏度高，檢測時間最短，試劑穩(wěn)定性好，可實現批量檢測，加上酚紅和血清對CCK-8法的檢測不會造成干擾，而且CCK-8的細胞毒性非常低，加入CCK-8顯色后，可以在不同時間反復用酶標儀讀數從而找到最佳測定時間，因此CCK-8法成為細胞增殖測定的首選方法。

注意事項：

  1. 細胞鋪板：鋪板時需不?；靹蚣毎麘乙?，這樣每孔細胞的接種密度的誤差才會小。建議每隔12個孔左右吹打混勻一次細胞懸液。

  2. CCK-8添加時間問題：雖然建議種板4小時后細胞貼壁即可添加CCK-8，但是細胞忽然換了環(huán)境，4個小時細胞狀態(tài)可能還不夠穩(wěn)定，如果過早添加CCK-8，由于細胞狀態(tài)不穩(wěn)定容易導致實驗結果的可重復性差，所以可以采取種板過夜后添加CCK-8方法。

  3. 細胞的接種密度問題：通常建議每孔3-8千個細胞，細胞數過少或過密都會對細胞狀態(tài)有影響。一般以顯微鏡下每孔密度大約為75-80%的時候加藥，該密度下結果更為穩(wěn)定。如果接種細胞數量過少，也可以在板中孵育細胞密度至80%左右再加藥。

  4. CCK8試劑與細胞培養(yǎng)基混勻的問題：考慮到孵育時每孔蒸發(fā)量不一樣，所以在加CCK8時，應該將舊的培養(yǎng)基吸出，加入新鮮的細胞培養(yǎng)基與CCK8混勻液（100：10）進行檢測。