產(chǎn)品用途
單增李斯特顯色培養(yǎng)基用于分離和初步鑒別單增李斯特菌。
檢驗(yàn)原理
蛋白胨、酵母膏粉提供碳氮源和微量元素;氯化鈉維持均衡的滲透壓;瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑;色素與單增李斯特氏菌具有的酶發(fā)生特異性反應(yīng)，水解底物，釋放出顯色基團(tuán)，在平板上，單增李斯特氏菌呈現(xiàn)綠~藍(lán)綠色的光滑規(guī)則的小菌落;抑制劑和配套試劑可抑制雜菌的生長(zhǎng)。
單增李斯特顯色培養(yǎng)基配方成分
| 配方(每升) | 含量 |
|---|---|
| 蛋白胨 | 15.0g |
| 蛋白胨 | 15.0g |
| 蛋白胨 | 15.0g |
| 蛋白胨 | 15.0g |
使用方法
1、稱取單增李斯特顯色培養(yǎng)基干粉47.3g，加入蒸餾水或去離子水1 L，攪拌加熱煮沸至完全溶解，分裝三角瓶，充分溶解，121℃高壓滅菌15min，冷至50℃左右。
2、取10支配套試劑分別加入1mL無菌水，使之完全溶解。
3、將配套試劑加入到已冷至48℃左右基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，充分混勻后傾注無菌平皿。
4、按國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、SN標(biāo)準(zhǔn)、FDA標(biāo)準(zhǔn)或其它方法制備樣品液，進(jìn)行增菌培養(yǎng)后，用接種環(huán)取1環(huán)增菌液，劃線接種于顯色平板上，置于36±1℃培養(yǎng)24-48小時(shí)。
5、觀察結(jié)果。致病性李斯特24h后開始出現(xiàn)藍(lán)綠色，至36～48h藍(lán)綠色明顯。挑取顯色平板上呈藍(lán)綠色光滑規(guī)則，直徑約1～2mm的可疑單菌落進(jìn)行進(jìn)一步的試驗(yàn)。
6、對(duì)疑似單增李斯特氏菌菌落可使用HK-MID Listeria或API20E或生化管進(jìn)行下一步的鑒定。
注：如產(chǎn)品類型為干粉，按上述1-6進(jìn)行操作;若為即用型平板，按4-6進(jìn)行操作即可。
質(zhì)量控制
1、外觀方面
干粉基礎(chǔ)：流動(dòng)性良好的淡黃色粉末。配套試劑：淡黃色凍干粉。
制備好平板：淡黃色不透明凝膠。
2、生物學(xué)方面
下列菌株接種單增李斯特氏菌顯色培養(yǎng)基后于36±1℃培養(yǎng)24-48h生長(zhǎng)情況如下表：
| 質(zhì)控菌株及編號(hào) | 指標(biāo) | 標(biāo)準(zhǔn)值 | 特征性反應(yīng) |
|---|---|---|---|
| 單增李斯特氏菌ATCC19115 | 生長(zhǎng)率 | PR≥0.5 | 藍(lán)綠色光滑規(guī)則小菌落，直徑1.5-2㎜ |
| 單增李斯特氏菌ATCC19115 | 生長(zhǎng)率 | PR≥0.5 | 藍(lán)綠色光滑規(guī)則小菌落，直徑1.5-2㎜ |
儲(chǔ)存條件及保質(zhì)期
干粉培養(yǎng)基：2～8℃避光保存，用后立即旋緊瓶蓋。貯存期兩年。
配套試劑：2～8℃避光保存。貯存期兩年。
即用型平板：2～8℃避光保存，最多一周。
注意事項(xiàng)
1、稱量時(shí)注意粉塵，佩戴口罩操作以避免引起呼吸道系統(tǒng)不適。
2、干粉培養(yǎng)基使用后立即旋緊瓶蓋，避免吸潮結(jié)塊。
3、自制平板時(shí)需注意培養(yǎng)基的厚度，厚度過薄容易造成瓊脂水分保持性下降，開裂;因此，一般需要15-20mL(Φ90mm)體積培養(yǎng)基，平板培養(yǎng)基厚度至少為2mm。
4、即用型成品平板應(yīng)該盡量保持在2-8℃下保存且與存放容器冷凝管保持一定距離以避免凍損壞。產(chǎn)品多次在低溫與常溫之間變更會(huì)引起瓊脂的泌水，屬于正?，F(xiàn)象。使用前應(yīng)平衡至室溫且盡量在無菌干燥箱中預(yù)干燥。
5、質(zhì)檢報(bào)告可以登錄環(huán)凱網(wǎng)站http://www.huankai.com，打開“客服中心”頁面，輸入產(chǎn)品批號(hào)下載。
廢物處理
檢測(cè)之后帶菌平板置于121℃下高壓滅菌30分鐘后處理
執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)
Q/HKSJ 03 普通微生物培養(yǎng)基
