你真的了解細(xì)胞代次的意思嗎？如何計算細(xì)胞傳代次數(shù)？
發(fā)布時間：2025-03-17 瀏覽次數(shù)：210
大家是否確定細(xì)胞傳代數(shù)是什么意思？對如何計算它并跟蹤細(xì)胞培養(yǎng)物傳代數(shù)感到困惑？想知道細(xì)胞最大傳代數(shù)是否有上限嗎？
我們所說的細(xì)胞傳代是什么意思？
如果提供足夠的空間、營養(yǎng)和環(huán)境條件，培養(yǎng)的細(xì)胞將呈對數(shù)生長。然而，它們達(dá)到了一個空間變得有限的地步，如果不采取干預(yù)，細(xì)胞生長會減慢，細(xì)胞會開始死亡。
這就是為什么需要定期檢查細(xì)胞的匯合度，一旦它們達(dá)到約80%的匯合度，需要“分裂”或傳代培養(yǎng)細(xì)胞。這也稱為細(xì)胞傳代。
那么什么是細(xì)胞傳代數(shù)呢？
細(xì)胞傳代數(shù)只是計算您分流或傳代細(xì)胞的次數(shù)。每次完成該過程時，應(yīng)該增加傳代數(shù) （p number）。傳代號通常寫在培養(yǎng)箱中的細(xì)胞培養(yǎng)瓶或板上，當(dāng)細(xì)胞冷凍時寫在凍存管上。這提供了一種簡單易行的方法來跟蹤通道編號。
為什么我們需要監(jiān)測和記錄細(xì)胞傳代次數(shù)？
永生化細(xì)胞系，包括 HeLa、HEK293 和 U2OS 細(xì)胞，通常具有遺傳不穩(wěn)定性的特點(diǎn)，使其容易隨著時間的推移而變化。此外，培養(yǎng)條件可能會提供選擇性壓力，導(dǎo)致細(xì)胞群隨時間發(fā)生變化（例如，快速生長的細(xì)胞將超過生長緩慢的細(xì)胞）。因此，較低細(xì)胞傳代數(shù)（例如，p=3）的細(xì)胞組成可能與較高傳代細(xì)胞（例如，p=40）的細(xì)胞組成具有非常不同的特性和行為。原代細(xì)胞往往比永生化細(xì)胞的遺傳穩(wěn)定性高得多。然而，它們通常在一定數(shù)量的細(xì)胞傳代后會經(jīng)歷衰老，并且仍然會受到選擇壓力的影響。通過遺傳不穩(wěn)定或選擇壓力帶來的變化可能導(dǎo)致表型變化，并影響細(xì)胞對治療或?qū)嶒?yàn)條件的反應(yīng)。這可能會影響結(jié)果的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。記錄傳代次數(shù)可以跟蹤細(xì)胞的“年齡”，建議在規(guī)定的傳代次數(shù)后停用細(xì)胞，以保持實(shí)驗(yàn)的可靠性。此外，還建議在進(jìn)行任何實(shí)驗(yàn)時記錄細(xì)胞的傳代次數(shù)，因?yàn)檫@樣，如果結(jié)果有任何異常，可以考慮傳代次數(shù)。
細(xì)胞的最大傳代數(shù)是多少？
我們所說的高傳代細(xì)胞是什么意思？確定細(xì)胞的最大傳代數(shù)類似于詢問一根繩子有多長。就理論上可以傳代細(xì)胞多長時間而言，這取決于細(xì)胞系。理論上，永生化細(xì)胞系可以無限傳代。然而，正如我們上面所討論的，隨著時間的推移，由于遺傳不穩(wěn)定性和選擇壓力，它們可能會經(jīng)歷表型和種群變化。實(shí)際上，應(yīng)限制細(xì)胞傳代以防止群體和遺傳漂變，理想情況下，應(yīng)使用相似的傳代數(shù)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對于細(xì)胞系，沒有定義的最大傳代次數(shù)，但強(qiáng)烈建議保持較低的傳代次數(shù)。然而，低的含義可能有所不同，一些建議建議將細(xì)胞傳代次數(shù)限制在不超過 10-20 次傳代，而醫(yī)療保健和制藥環(huán)境中的一般指南應(yīng)將傳代次數(shù)限制在最多 5 次。
關(guān)于標(biāo)記編號的常見問題
我應(yīng)該從哪個編號開始？如果大家有一種新的細(xì)胞培養(yǎng)物，要么來自冷凍庫存，要么來自 ATCC 等供應(yīng)商，要么來自其他實(shí)驗(yàn)室。你是否重置標(biāo)記為第一次傳代，或者，也許從P0開始？
無論從何處采購細(xì)胞儲備液，購買的細(xì)胞可能已經(jīng)經(jīng)歷了多次傳代。供應(yīng)商應(yīng)告知您所購買的庫存的通過編號，可能會發(fā)現(xiàn)需要為通過編號為2或更少的庫存支付溢價。如果要從實(shí)驗(yàn)室的冷凍供應(yīng)中檢索細(xì)胞原液或從其他實(shí)驗(yàn)室捐贈細(xì)胞，則應(yīng)確保詢問細(xì)胞的傳代次數(shù)。
然后，應(yīng)該從提供的傳代編號繼續(xù)傳代數(shù)。請注意，從原液中將細(xì)胞回收到培養(yǎng)物中的過程不算作一次傳代。
如果提供的原液的傳代編號為2，那么在最初培養(yǎng)它們的培養(yǎng)瓶上寫下的傳代編號為2。只有隨后對它們進(jìn)行傳代培養(yǎng)時，才會將傳代數(shù)增加到3。
凍融細(xì)胞算作一次傳代嗎？
上面的圖解釋了如何從細(xì)胞儲備液中設(shè)置傳代數(shù)。但是，如果自己冷凍細(xì)胞，然后解凍，那么冷凍和解凍細(xì)胞的過程算作一次傳代嗎？讓我們再次看一個視覺對象來幫助解釋這一點(diǎn)。假設(shè)有一個細(xì)胞儲備板，要將其冷凍以備后用，其傳代數(shù)為4。
對于貼壁細(xì)胞，在準(zhǔn)備冷凍細(xì)胞之前，需要從板中胰蛋白酶消化（或以某種方式分離細(xì)胞）。此步驟是傳代培養(yǎng)步驟，這意味著冷凍原液的傳代次數(shù)應(yīng)增加1至5。這意味著可以在樣品瓶上寫下這些原液的 p=5。當(dāng)?shù)谝淮位厥占?xì)胞時，不需要增加這個數(shù)字，只需在隨后傳代它們時增加它們。
如何保持低傳代數(shù)？
1. 從信譽(yù)良好的手機(jī)來源購買細(xì)胞，例如 ATCC。
從有問題的供應(yīng)商處購買儲液或從其他實(shí)驗(yàn)室獲得儲液意味著可能沒有可靠的傳代數(shù)，因?yàn)槔鋬龊蛡鞔囵B(yǎng)方案以及傳代數(shù)分配方式各不相同。
2. 盡早凍結(jié)庫存。
當(dāng)您獲得并恢復(fù)您的種群時，應(yīng)該傳代它們，然后凍結(jié)第一輪傳代的種群（圖 3）。這提供了一組低傳代數(shù)的庫存，當(dāng)工作庫存達(dá)到傳代上限時，可以返回。
文章來源：環(huán)凱轉(zhuǎn)載于“ 智者不學(xué)生物”公眾號；原標(biāo)題：“你真的了解細(xì)胞代次的意思嗎？如何計算細(xì)胞傳代次數(shù)？”；作者~腌制油梨。
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