你真的了解細胞代次的意思嗎？如何計算細胞傳代次數(shù)？
發(fā)布時間：2025-03-17 瀏覽次數(shù)：215
大家是否確定細胞傳代數(shù)是什么意思？對如何計算它并跟蹤細胞培養(yǎng)物傳代數(shù)感到困惑？想知道細胞最大傳代數(shù)是否有上限嗎？
我們所說的細胞傳代是什么意思？
如果提供足夠的空間、營養(yǎng)和環(huán)境條件，培養(yǎng)的細胞將呈對數(shù)生長。然而，它們達到了一個空間變得有限的地步，如果不采取干預，細胞生長會減慢，細胞會開始死亡。
這就是為什么需要定期檢查細胞的匯合度，一旦它們達到約80%的匯合度，需要“分裂”或傳代培養(yǎng)細胞。這也稱為細胞傳代。
那么什么是細胞傳代數(shù)呢？
細胞傳代數(shù)只是計算您分流或傳代細胞的次數(shù)。每次完成該過程時，應該增加傳代數(shù) （p number）。傳代號通常寫在培養(yǎng)箱中的細胞培養(yǎng)瓶或板上，當細胞冷凍時寫在凍存管上。這提供了一種簡單易行的方法來跟蹤通道編號。
為什么我們需要監(jiān)測和記錄細胞傳代次數(shù)？
永生化細胞系，包括 HeLa、HEK293 和 U2OS 細胞，通常具有遺傳不穩(wěn)定性的特點，使其容易隨著時間的推移而變化。此外，培養(yǎng)條件可能會提供選擇性壓力，導致細胞群隨時間發(fā)生變化（例如，快速生長的細胞將超過生長緩慢的細胞）。因此，較低細胞傳代數(shù)（例如，p=3）的細胞組成可能與較高傳代細胞（例如，p=40）的細胞組成具有非常不同的特性和行為。原代細胞往往比永生化細胞的遺傳穩(wěn)定性高得多。然而，它們通常在一定數(shù)量的細胞傳代后會經(jīng)歷衰老，并且仍然會受到選擇壓力的影響。通過遺傳不穩(wěn)定或選擇壓力帶來的變化可能導致表型變化，并影響細胞對治療或?qū)嶒灄l件的反應。這可能會影響結(jié)果的準確性和可重復性。記錄傳代次數(shù)可以跟蹤細胞的“年齡”，建議在規(guī)定的傳代次數(shù)后停用細胞，以保持實驗的可靠性。此外，還建議在進行任何實驗時記錄細胞的傳代次數(shù)，因為這樣，如果結(jié)果有任何異常，可以考慮傳代次數(shù)。
細胞的最大傳代數(shù)是多少？
我們所說的高傳代細胞是什么意思？確定細胞的最大傳代數(shù)類似于詢問一根繩子有多長。就理論上可以傳代細胞多長時間而言，這取決于細胞系。理論上，永生化細胞系可以無限傳代。然而，正如我們上面所討論的，隨著時間的推移，由于遺傳不穩(wěn)定性和選擇壓力，它們可能會經(jīng)歷表型和種群變化。實際上，應限制細胞傳代以防止群體和遺傳漂變，理想情況下，應使用相似的傳代數(shù)進行實驗。對于細胞系，沒有定義的最大傳代次數(shù)，但強烈建議保持較低的傳代次數(shù)。然而，低的含義可能有所不同，一些建議建議將細胞傳代次數(shù)限制在不超過 10-20 次傳代，而醫(yī)療保健和制藥環(huán)境中的一般指南應將傳代次數(shù)限制在最多 5 次。
關于標記編號的常見問題
我應該從哪個編號開始？如果大家有一種新的細胞培養(yǎng)物，要么來自冷凍庫存，要么來自 ATCC 等供應商，要么來自其他實驗室。你是否重置標記為第一次傳代，或者，也許從P0開始？
無論從何處采購細胞儲備液，購買的細胞可能已經(jīng)經(jīng)歷了多次傳代。供應商應告知您所購買的庫存的通過編號，可能會發(fā)現(xiàn)需要為通過編號為2或更少的庫存支付溢價。如果要從實驗室的冷凍供應中檢索細胞原液或從其他實驗室捐贈細胞，則應確保詢問細胞的傳代次數(shù)。
然后，應該從提供的傳代編號繼續(xù)傳代數(shù)。請注意，從原液中將細胞回收到培養(yǎng)物中的過程不算作一次傳代。
如果提供的原液的傳代編號為2，那么在最初培養(yǎng)它們的培養(yǎng)瓶上寫下的傳代編號為2。只有隨后對它們進行傳代培養(yǎng)時，才會將傳代數(shù)增加到3。
凍融細胞算作一次傳代嗎？
上面的圖解釋了如何從細胞儲備液中設置傳代數(shù)。但是，如果自己冷凍細胞，然后解凍，那么冷凍和解凍細胞的過程算作一次傳代嗎？讓我們再次看一個視覺對象來幫助解釋這一點。假設有一個細胞儲備板，要將其冷凍以備后用，其傳代數(shù)為4。
對于貼壁細胞，在準備冷凍細胞之前，需要從板中胰蛋白酶消化（或以某種方式分離細胞）。此步驟是傳代培養(yǎng)步驟，這意味著冷凍原液的傳代次數(shù)應增加1至5。這意味著可以在樣品瓶上寫下這些原液的 p=5。當?shù)谝淮位厥占毎麜r，不需要增加這個數(shù)字，只需在隨后傳代它們時增加它們。
如何保持低傳代數(shù)？
1. 從信譽良好的手機來源購買細胞，例如 ATCC。
從有問題的供應商處購買儲液或從其他實驗室獲得儲液意味著可能沒有可靠的傳代數(shù)，因為冷凍和傳代培養(yǎng)方案以及傳代數(shù)分配方式各不相同。
2. 盡早凍結(jié)庫存。
當您獲得并恢復您的種群時，應該傳代它們，然后凍結(jié)第一輪傳代的種群（圖 3）。這提供了一組低傳代數(shù)的庫存，當工作庫存達到傳代上限時，可以返回。
文章來源：環(huán)凱轉(zhuǎn)載于“ 智者不學生物”公眾號；原標題：“你真的了解細胞代次的意思嗎？如何計算細胞傳代次數(shù)？”；作者~腌制油梨。
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