科研解惑 | 菌種傳代次數(shù)必須在5代以內(nèi)？
發(fā)布時(shí)間：2024-12-30 瀏覽次數(shù)：537
菌種傳代次數(shù)控制在5代以內(nèi)的原因主要包括以下幾點(diǎn)：
● 防止菌種衰退：傳代次數(shù)越多，菌種發(fā)生自發(fā)突變（尤其是負(fù)突變）的幾率越高，特別是那些可能導(dǎo)致菌種特性衰退的突變。傳代次數(shù)過(guò)多，群體中個(gè)別的衰退型細(xì)胞數(shù)量增加并占據(jù)優(yōu)勢(shì)越快，導(dǎo)致群體表型出現(xiàn)衰退。
● 控制菌種變異風(fēng)險(xiǎn)：過(guò)度的傳代會(huì)增加菌種變異的風(fēng)險(xiǎn)，影響菌種的標(biāo)準(zhǔn)作用和特性。中國(guó)藥典規(guī)定，培養(yǎng)基靈敏度檢查所用的菌株傳代次數(shù)不得超過(guò)5代，以防止菌株因傳代次數(shù)過(guò)多引起衰退影響檢驗(yàn)。
● 保持菌種的遺傳穩(wěn)定性：傳代次數(shù)的控制有助于保持菌種的遺傳穩(wěn)定性，避免因過(guò)度傳代導(dǎo)致的表型變化和遺傳突變。
● 確保檢驗(yàn)和生產(chǎn)效率：使用已衰退的菌種進(jìn)行生產(chǎn)會(huì)影響生產(chǎn)效率，而把已衰退菌種作為陽(yáng)性菌株進(jìn)行檢驗(yàn)，則會(huì)影響檢驗(yàn)正確率。
● 遵循藥典規(guī)定：《中國(guó)藥典》2020年版9203藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則中指出，工作菌株的傳代次數(shù)應(yīng)嚴(yán)格控制，不得超過(guò)5代（從菌種保藏機(jī)構(gòu)獲得的標(biāo)準(zhǔn)菌株為第0代）。
“5代”是經(jīng)驗(yàn)值還是理論值？
菌種傳代次數(shù)必須控制在5代以內(nèi)是經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期實(shí)踐積累得出的經(jīng)驗(yàn)結(jié)論。這一經(jīng)驗(yàn)值的確立旨在避免長(zhǎng)期傳代導(dǎo)致菌種的遺傳特性喪失或發(fā)生變異，從而確保菌種在研究和生產(chǎn)中具有穩(wěn)定的遺傳特性和生物活性。因此，控制菌種傳代在5代以內(nèi)可以有效減少菌種的變異風(fēng)險(xiǎn)，保證實(shí)驗(yàn)和生產(chǎn)的可靠性和穩(wěn)定性。
“5代”這個(gè)數(shù)字既包含了經(jīng)驗(yàn)值也有一定的理論依據(jù)。它是基于微生物學(xué)研究中的經(jīng)驗(yàn)積累得出的結(jié)論，目的是為了減少由于長(zhǎng)期傳代導(dǎo)致的菌種退化或變異，確保研究和生產(chǎn)中使用的菌種具有穩(wěn)定的遺傳特性和生物活性。這個(gè)數(shù)字并不是隨意設(shè)定的，而是基于實(shí)驗(yàn)和實(shí)踐，認(rèn)為5代傳代次數(shù)是一個(gè)合理的限制，以保持菌種的穩(wěn)定性和可靠性。
同時(shí)，也有理論支持，因?yàn)閭鞔螖?shù)越多，菌種發(fā)生變異的風(fēng)險(xiǎn)越高，而5代傳代次數(shù)被認(rèn)為可以較好地平衡菌種的穩(wěn)定性和實(shí)驗(yàn)的需要。因此，5代傳代次數(shù)的規(guī)定是一個(gè)結(jié)合了經(jīng)驗(yàn)和理論的結(jié)果。
“菌種傳代次數(shù)必須在5代以內(nèi)？5代以上行不行？
根據(jù)常識(shí)，菌種的傳代次數(shù)與變異率呈正相關(guān)，傳代次數(shù)越多，變異風(fēng)險(xiǎn)越高。雖然并非絕對(duì)禁止使用5代以上的菌種，但超過(guò)5代后，菌種的穩(wěn)定性和可靠性會(huì)受到威脅，容易導(dǎo)致問(wèn)題的出現(xiàn)。
只有當(dāng)經(jīng)過(guò)5代傳代后，菌種的形態(tài)結(jié)構(gòu)、生理生化性狀等仍然保持不變時(shí)，才能考慮繼續(xù)使用。然而，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，過(guò)多傳代仍然是不建議的，因?yàn)檫@會(huì)增加變異和風(fēng)險(xiǎn)的可能性，相當(dāng)于“自取其禍”。因此，最好遵循傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)，控制菌種傳代在5代以內(nèi)，以確保實(shí)驗(yàn)和生產(chǎn)的準(zhǔn)確性和可靠性。
至于5代以上是否可行，原則上是不建議的。因?yàn)槌^(guò)5代后，菌種變異的風(fēng)險(xiǎn)會(huì)增加，可能會(huì)導(dǎo)致菌種的表型變化、遺傳突變和污染的可能性增加。雖然并沒(méi)有說(shuō)5代以上的菌種就不能使用，但是越容易出現(xiàn)問(wèn)題。
如果5代以上菌種的形態(tài)結(jié)構(gòu)、生理生化性狀等均未發(fā)生變化，理論上還是可以使用的，但在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，并不建議過(guò)多傳代。因此，為了保持菌種的遺傳穩(wěn)定性和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，通常推薦控制在5代以內(nèi)。
依據(jù)是什么？
根據(jù)《中國(guó)藥典：2020年版?四部-9203藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則》，工作菌株的傳代次數(shù)應(yīng)嚴(yán)格控制在5代以內(nèi)。這一規(guī)定旨在防止過(guò)度傳代增加菌種變異的風(fēng)險(xiǎn)。在該標(biāo)準(zhǔn)中，將活的培養(yǎng)物接種到微生物生長(zhǎng)的新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng)被定義為傳代1次，任何形式的轉(zhuǎn)種都被計(jì)算在內(nèi)。實(shí)驗(yàn)室在必要時(shí)應(yīng)對(duì)工作菌株的特性和純度進(jìn)行確認(rèn)，以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。
參照方法：
根據(jù)微生物菌種傳代技術(shù)知識(shí)圖譜中的相關(guān)內(nèi)容，結(jié)合收集的大量文獻(xiàn)資料，并總結(jié)成一篇文章，可以得出菌種傳代次數(shù)必須在5代以內(nèi)的結(jié)論。這一結(jié)論的參考來(lái)源包括對(duì)菌種傳代技術(shù)的系統(tǒng)性了解和對(duì)過(guò)往文獻(xiàn)資料的深入研究。通過(guò)這些參照方法，我們能夠更好地理解和確認(rèn)控制菌種傳代在5代以內(nèi)的重要性，并確保菌種的遺傳特性和生物活性的穩(wěn)定性。
菌種如何保藏？
根據(jù)藥典中的規(guī)定和微生物菌種保藏與活化技術(shù)指南，菌種傳代次數(shù)必須控制在5代以內(nèi)。為延長(zhǎng)菌種保存時(shí)間，建議采用低溫冷凍干燥、液氮貯存、超低溫冷凍等方法保存菌種，其中低于-70℃或低溫冷凍干燥可有效延長(zhǎng)保存時(shí)間。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株可用于每月或每周1次轉(zhuǎn)種制備工作菌株。
值得注意的是，冷凍菌種一經(jīng)解凍轉(zhuǎn)種制備工作菌株后，不得重新冷凍和再次使用，以確保菌種的穩(wěn)定性和純度。因此，在進(jìn)行菌種傳代時(shí)，除了控制傳代次數(shù)在5代以內(nèi)外，還應(yīng)嚴(yán)格遵循正確的菌種保存方法，以確保菌種的質(zhì)量和穩(wěn)定性。
操作中，如何確認(rèn)是哪一代菌種？
在實(shí)際操作中，確認(rèn)菌種的代數(shù)是一個(gè)重要的任務(wù)，尤其是在實(shí)驗(yàn)室菌種管理不夠規(guī)范的情況下。當(dāng)實(shí)驗(yàn)室接收到菌種時(shí)，可以將接收到的菌種作為0代，并進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定和生理生化特性檢測(cè)，評(píng)估菌株的活力。如果鑒定結(jié)果正常且菌株沒(méi)有問(wèn)題，即可將此批菌株確定為F0，即母代菌種。
然而，需要明確的是，這些菌株并非藥典中規(guī)定的0代菌種。在實(shí)際操作中，建議實(shí)驗(yàn)室對(duì)接收到的菌株進(jìn)行詳細(xì)記錄和標(biāo)記，包括來(lái)源、接收時(shí)間等信息，以便追蹤并確認(rèn)菌株的代數(shù)。通過(guò)嚴(yán)格的記錄和標(biāo)記以及定期進(jìn)行鑒定和檢測(cè)，可以更好地管理和監(jiān)控菌種的代數(shù)，確保傳代次數(shù)控制在規(guī)定的5代以內(nèi)。
文章來(lái)源：環(huán)凱（官網(wǎng)：huankai.com）轉(zhuǎn)載于“ 學(xué)術(shù)策 ”公眾號(hào)；原作者~小1。
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