科研解惑 | 菌種傳代次數(shù)必須在5代以內(nèi)？
發(fā)布時間：2024-12-30 瀏覽次數(shù)：538
菌種傳代次數(shù)控制在5代以內(nèi)的原因主要包括以下幾點：
● 防止菌種衰退：傳代次數(shù)越多，菌種發(fā)生自發(fā)突變（尤其是負突變）的幾率越高，特別是那些可能導致菌種特性衰退的突變。傳代次數(shù)過多，群體中個別的衰退型細胞數(shù)量增加并占據(jù)優(yōu)勢越快，導致群體表型出現(xiàn)衰退。
● 控制菌種變異風險：過度的傳代會增加菌種變異的風險，影響菌種的標準作用和特性。中國藥典規(guī)定，培養(yǎng)基靈敏度檢查所用的菌株傳代次數(shù)不得超過5代，以防止菌株因傳代次數(shù)過多引起衰退影響檢驗。
● 保持菌種的遺傳穩(wěn)定性：傳代次數(shù)的控制有助于保持菌種的遺傳穩(wěn)定性，避免因過度傳代導致的表型變化和遺傳突變。
● 確保檢驗和生產(chǎn)效率：使用已衰退的菌種進行生產(chǎn)會影響生產(chǎn)效率，而把已衰退菌種作為陽性菌株進行檢驗，則會影響檢驗正確率。
● 遵循藥典規(guī)定：《中國藥典》2020年版9203藥品微生物實驗室質(zhì)量管理指導原則中指出，工作菌株的傳代次數(shù)應嚴格控制，不得超過5代（從菌種保藏機構獲得的標準菌株為第0代）。
“5代”是經(jīng)驗值還是理論值？
菌種傳代次數(shù)必須控制在5代以內(nèi)是經(jīng)過長期實踐積累得出的經(jīng)驗結(jié)論。這一經(jīng)驗值的確立旨在避免長期傳代導致菌種的遺傳特性喪失或發(fā)生變異，從而確保菌種在研究和生產(chǎn)中具有穩(wěn)定的遺傳特性和生物活性。因此，控制菌種傳代在5代以內(nèi)可以有效減少菌種的變異風險，保證實驗和生產(chǎn)的可靠性和穩(wěn)定性。
“5代”這個數(shù)字既包含了經(jīng)驗值也有一定的理論依據(jù)。它是基于微生物學研究中的經(jīng)驗積累得出的結(jié)論，目的是為了減少由于長期傳代導致的菌種退化或變異，確保研究和生產(chǎn)中使用的菌種具有穩(wěn)定的遺傳特性和生物活性。這個數(shù)字并不是隨意設定的，而是基于實驗和實踐，認為5代傳代次數(shù)是一個合理的限制，以保持菌種的穩(wěn)定性和可靠性。
同時，也有理論支持，因為傳代次數(shù)越多，菌種發(fā)生變異的風險越高，而5代傳代次數(shù)被認為可以較好地平衡菌種的穩(wěn)定性和實驗的需要。因此，5代傳代次數(shù)的規(guī)定是一個結(jié)合了經(jīng)驗和理論的結(jié)果。
“菌種傳代次數(shù)必須在5代以內(nèi)？5代以上行不行？
根據(jù)常識，菌種的傳代次數(shù)與變異率呈正相關，傳代次數(shù)越多，變異風險越高。雖然并非絕對禁止使用5代以上的菌種，但超過5代后，菌種的穩(wěn)定性和可靠性會受到威脅，容易導致問題的出現(xiàn)。
只有當經(jīng)過5代傳代后，菌種的形態(tài)結(jié)構、生理生化性狀等仍然保持不變時，才能考慮繼續(xù)使用。然而，在實驗過程中，過多傳代仍然是不建議的，因為這會增加變異和風險的可能性，相當于“自取其禍”。因此，最好遵循傳統(tǒng)經(jīng)驗，控制菌種傳代在5代以內(nèi)，以確保實驗和生產(chǎn)的準確性和可靠性。
至于5代以上是否可行，原則上是不建議的。因為超過5代后，菌種變異的風險會增加，可能會導致菌種的表型變化、遺傳突變和污染的可能性增加。雖然并沒有說5代以上的菌種就不能使用，但是越容易出現(xiàn)問題。
如果5代以上菌種的形態(tài)結(jié)構、生理生化性狀等均未發(fā)生變化，理論上還是可以使用的，但在實驗過程中，并不建議過多傳代。因此，為了保持菌種的遺傳穩(wěn)定性和實驗結(jié)果的準確性，通常推薦控制在5代以內(nèi)。
依據(jù)是什么？
根據(jù)《中國藥典：2020年版?四部-9203藥品微生物實驗室質(zhì)量管理指導原則》，工作菌株的傳代次數(shù)應嚴格控制在5代以內(nèi)。這一規(guī)定旨在防止過度傳代增加菌種變異的風險。在該標準中，將活的培養(yǎng)物接種到微生物生長的新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng)被定義為傳代1次，任何形式的轉(zhuǎn)種都被計算在內(nèi)。實驗室在必要時應對工作菌株的特性和純度進行確認，以確保實驗結(jié)果的準確性和可靠性。
參照方法：
根據(jù)微生物菌種傳代技術知識圖譜中的相關內(nèi)容，結(jié)合收集的大量文獻資料，并總結(jié)成一篇文章，可以得出菌種傳代次數(shù)必須在5代以內(nèi)的結(jié)論。這一結(jié)論的參考來源包括對菌種傳代技術的系統(tǒng)性了解和對過往文獻資料的深入研究。通過這些參照方法，我們能夠更好地理解和確認控制菌種傳代在5代以內(nèi)的重要性，并確保菌種的遺傳特性和生物活性的穩(wěn)定性。
菌種如何保藏？
根據(jù)藥典中的規(guī)定和微生物菌種保藏與活化技術指南，菌種傳代次數(shù)必須控制在5代以內(nèi)。為延長菌種保存時間，建議采用低溫冷凍干燥、液氮貯存、超低溫冷凍等方法保存菌種，其中低于-70℃或低溫冷凍干燥可有效延長保存時間。標準儲備菌株可用于每月或每周1次轉(zhuǎn)種制備工作菌株。
值得注意的是，冷凍菌種一經(jīng)解凍轉(zhuǎn)種制備工作菌株后，不得重新冷凍和再次使用，以確保菌種的穩(wěn)定性和純度。因此，在進行菌種傳代時，除了控制傳代次數(shù)在5代以內(nèi)外，還應嚴格遵循正確的菌種保存方法，以確保菌種的質(zhì)量和穩(wěn)定性。
操作中，如何確認是哪一代菌種？
在實際操作中，確認菌種的代數(shù)是一個重要的任務，尤其是在實驗室菌種管理不夠規(guī)范的情況下。當實驗室接收到菌種時，可以將接收到的菌種作為0代，并進行形態(tài)學鑒定和生理生化特性檢測，評估菌株的活力。如果鑒定結(jié)果正常且菌株沒有問題，即可將此批菌株確定為F0，即母代菌種。
然而，需要明確的是，這些菌株并非藥典中規(guī)定的0代菌種。在實際操作中，建議實驗室對接收到的菌株進行詳細記錄和標記，包括來源、接收時間等信息，以便追蹤并確認菌株的代數(shù)。通過嚴格的記錄和標記以及定期進行鑒定和檢測，可以更好地管理和監(jiān)控菌種的代數(shù)，確保傳代次數(shù)控制在規(guī)定的5代以內(nèi)。
文章來源：環(huán)凱（官網(wǎng)：huankai.com）轉(zhuǎn)載于“ 學術策 ”公眾號；原作者~小1。
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