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RAW 264.7，小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞，來源于雄性Abelson鼠科白血病病毒誘導(dǎo)的腫瘤，是常用的炎癥細(xì)胞模型之一，常見于研究細(xì)胞吞噬、細(xì)胞免疫、分子免疫學(xué)。

RAW264.7 屬單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞系，具有松散貼壁的短梭形細(xì)胞和圓形活細(xì)胞。細(xì)胞常用DMEM培養(yǎng)基，含10%優(yōu)質(zhì)胎牛血清，一般2-3天傳代一次，推薦傳代比例1:3-1:4，但RAW264.7在培養(yǎng)過程中容易出現(xiàn)細(xì)胞形態(tài)改變（長出偽足）、消化困難、生長緩慢等問題，需要我們特別注意以下幾點：

1. RAW 264.7 因其具有較強的吞噬能力，吞噬后釋放的趨化因子可促使細(xì)胞分化出偽足，粘附攀爬能力增強。若細(xì)胞吞噬抗原過多、培養(yǎng)環(huán)境惡劣，會促使細(xì)胞形態(tài)改變成多角形且面積增大，時常有較長的黑色觸角，導(dǎo)致細(xì)胞消化困難，因此要盡量避免細(xì)胞發(fā)生形態(tài)改變。即在接種細(xì)胞時保持一個適中的傳代密度，避免其向終末細(xì)胞分化。

2. RAW264.7喜歡連片生長，低密度下一片一片分布在培養(yǎng)皿中且不相連接，高密度下才會連成大片且可能疊加成層，導(dǎo)致部分細(xì)胞漂浮無法貼壁，因此，培養(yǎng)時要密切關(guān)注細(xì)胞匯合度，控制細(xì)胞生長速度，不可等到疊加成層才傳代。

3. RAW264.7傳代后貼壁較短，約半小時即可貼壁，細(xì)胞呈圓形，折光度很好，生長一段時間后，部分細(xì)胞會變成類似四角形，伸出偽足之類。此時必須傳代，無論匯合度如何都需要進行傳代，避免細(xì)胞形態(tài)進一步發(fā)生改變。

4. RAW264.7不能用胰酶消化，推薦吹打傳代。分化的細(xì)胞貼壁牢固，傳代的時候千萬不要強制性吹下這些細(xì)胞，只接種容易吹下的那些未分化細(xì)胞；吹打的力度一定要輕，切勿暴力吹打；推薦使用巴氏管吹打；亦可在液體環(huán)境下用細(xì)胞刮刀將細(xì)胞刮下來。

5. 細(xì)胞培養(yǎng)時無法保證100% 不分化，但通過傳代可以更好地控制細(xì)胞分化率。

6. RAW264.7在不同生長密度下細(xì)胞形態(tài)不同，若復(fù)蘇密度太高，細(xì)胞增殖過快，會加劇細(xì)胞的營養(yǎng)缺失，加速細(xì)胞老化；若復(fù)蘇密度太低，細(xì)胞生長緩慢，推薦采用直徑6cm的培養(yǎng)皿復(fù)蘇細(xì)胞，細(xì)胞數(shù)量控制在1.0×10^6~1.5×10^6個。

7. 細(xì)胞剛接種有少量短觸角，屬于正?，F(xiàn)象，如果出現(xiàn)胞體變大，突觸伸長可以已經(jīng)發(fā)生了分化。對于輕微分化細(xì)胞，可以輕吹起部分細(xì)胞，更換培養(yǎng)環(huán)境后進行調(diào)整。

RAW 264.7培養(yǎng)注意事項：

      1. RAW 264.7 容易發(fā)生形態(tài)變化，在接種細(xì)胞時務(wù)必保持適中的傳代密度，避免其向終末細(xì)胞分化；

      2. RAW264.7喜歡連片生長，在不同生長密度下細(xì)胞形態(tài)不同，高密度下細(xì)胞容易漂浮，因此密切關(guān)注細(xì)胞匯合度，及時傳代；

      3. RAW264.7不能用胰酶消化，推薦吹打傳代，亦可在液體環(huán)境下用細(xì)胞刮刀將細(xì)胞刮下來；

      4. 細(xì)胞剛接種有少量短觸角，屬于正?，F(xiàn)象，如果出現(xiàn)胞體變大，突觸伸長可能已經(jīng)發(fā)生了分化。對于輕微分化細(xì)胞，可以輕吹起部分細(xì)胞，更換培養(yǎng)環(huán)境后進行調(diào)整，或者盡快傳代，避免形態(tài)進一步改變。

文章來源：“豐暉生物”公眾號，作者~。
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