RAW?264.7細(xì)胞培養(yǎng)，小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞培養(yǎng)攻略
發(fā)布時(shí)間：2023-11-08 瀏覽次數(shù)：347
RAW 264.7，小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞，來(lái)源于雄性Abelson鼠科白血病病毒誘導(dǎo)的腫瘤，是常用的炎癥細(xì)胞模型之一，常見(jiàn)于研究細(xì)胞吞噬、細(xì)胞免疫、分子免疫學(xué)。
RAW264.7 屬單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞系，具有松散貼壁的短梭形細(xì)胞和圓形活細(xì)胞。細(xì)胞常用DMEM培養(yǎng)基，含10%優(yōu)質(zhì)胎牛血清，一般2-3天傳代一次，推薦傳代比例1:3-1:4，但RAW264.7在培養(yǎng)過(guò)程中容易出現(xiàn)細(xì)胞形態(tài)改變（長(zhǎng)出偽足）、消化困難、生長(zhǎng)緩慢等問(wèn)題，需要我們特別注意以下幾點(diǎn)：
1. RAW 264.7 因其具有較強(qiáng)的吞噬能力，吞噬后釋放的趨化因子可促使細(xì)胞分化出偽足，粘附攀爬能力增強(qiáng)。若細(xì)胞吞噬抗原過(guò)多、培養(yǎng)環(huán)境惡劣，會(huì)促使細(xì)胞形態(tài)改變成多角形且面積增大，時(shí)常有較長(zhǎng)的黑色觸角，導(dǎo)致細(xì)胞消化困難，因此要盡量避免細(xì)胞發(fā)生形態(tài)改變。即在接種細(xì)胞時(shí)保持一個(gè)適中的傳代密度，避免其向終末細(xì)胞分化。
2. RAW264.7喜歡連片生長(zhǎng)，低密度下一片一片分布在培養(yǎng)皿中且不相連接，高密度下才會(huì)連成大片且可能疊加成層，導(dǎo)致部分細(xì)胞漂浮無(wú)法貼壁，因此，培養(yǎng)時(shí)要密切關(guān)注細(xì)胞匯合度，控制細(xì)胞生長(zhǎng)速度，不可等到疊加成層才傳代。
3. RAW264.7傳代后貼壁較短，約半小時(shí)即可貼壁，細(xì)胞呈圓形，折光度很好，生長(zhǎng)一段時(shí)間后，部分細(xì)胞會(huì)變成類(lèi)似四角形，伸出偽足之類(lèi)。此時(shí)必須傳代，無(wú)論匯合度如何都需要進(jìn)行傳代，避免細(xì)胞形態(tài)進(jìn)一步發(fā)生改變。
4. RAW264.7不能用胰酶消化，推薦吹打傳代。分化的細(xì)胞貼壁牢固，傳代的時(shí)候千萬(wàn)不要強(qiáng)制性吹下這些細(xì)胞，只接種容易吹下的那些未分化細(xì)胞；吹打的力度一定要輕，切勿暴力吹打；推薦使用巴氏管吹打；亦可在液體環(huán)境下用細(xì)胞刮刀將細(xì)胞刮下來(lái)。
5. 細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)無(wú)法保證100% 不分化，但通過(guò)傳代可以更好地控制細(xì)胞分化率。
6. RAW264.7在不同生長(zhǎng)密度下細(xì)胞形態(tài)不同，若復(fù)蘇密度太高，細(xì)胞增殖過(guò)快，會(huì)加劇細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)缺失，加速細(xì)胞老化；若復(fù)蘇密度太低，細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，推薦采用直徑6cm的培養(yǎng)皿復(fù)蘇細(xì)胞，細(xì)胞數(shù)量控制在1.0×10^6~1.5×10^6個(gè)。
7. 細(xì)胞剛接種有少量短觸角，屬于正?，F(xiàn)象，如果出現(xiàn)胞體變大，突觸伸長(zhǎng)可以已經(jīng)發(fā)生了分化。對(duì)于輕微分化細(xì)胞，可以輕吹起部分細(xì)胞，更換培養(yǎng)環(huán)境后進(jìn)行調(diào)整。
RAW 264.7培養(yǎng)注意事項(xiàng)：
1. RAW 264.7 容易發(fā)生形態(tài)變化，在接種細(xì)胞時(shí)務(wù)必保持適中的傳代密度，避免其向終末細(xì)胞分化；
2. RAW264.7喜歡連片生長(zhǎng)，在不同生長(zhǎng)密度下細(xì)胞形態(tài)不同，高密度下細(xì)胞容易漂浮，因此密切關(guān)注細(xì)胞匯合度，及時(shí)傳代；
3. RAW264.7不能用胰酶消化，推薦吹打傳代，亦可在液體環(huán)境下用細(xì)胞刮刀將細(xì)胞刮下來(lái)；
4. 細(xì)胞剛接種有少量短觸角，屬于正常現(xiàn)象，如果出現(xiàn)胞體變大，突觸伸長(zhǎng)可能已經(jīng)發(fā)生了分化。對(duì)于輕微分化細(xì)胞，可以輕吹起部分細(xì)胞，更換培養(yǎng)環(huán)境后進(jìn)行調(diào)整，或者盡快傳代，避免形態(tài)進(jìn)一步改變。
文章來(lái)源：“豐暉生物”公眾號(hào)，作者~。
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