中國工程院食品安全院士團隊

科研成果轉(zhuǎn)化平臺

產(chǎn)品名稱：DNA Gel/PCR Purification Kit

產(chǎn)品編號與包裝規(guī)格：

產(chǎn)品描述：本試劑盒采用獨特的離心吸附柱，既能從 TAE 或 TBE 瓊脂糖凝膠中回收 DNA 片段，又能用于直接純化 PCR 產(chǎn)物。溶液PC 中含有 pH 指示劑，可根據(jù)顏色來判斷溶膠或 PCR 產(chǎn)物回收是否達到最佳狀態(tài)。使用本產(chǎn)品可回收 100 bp-20 kb 大小的DNA 片段，回收率可達 80%。使用本試劑盒回收的 DNA 可適用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、測序、文庫篩選、連接和轉(zhuǎn)化等實驗。

使用建議：如果所提質(zhì)粒為低拷貝質(zhì)粒或大 10kb 的大質(zhì)粒，應加大菌體使用量，使用5～10mL 過夜培養(yǎng)物，同時按照比例增加 P1、P2、P3 的用量，洗脫緩沖液EB 應在65～70℃水浴預熱，在吸附和洗脫時可以適當?shù)难娱L時間，以增加提取效率。其它步驟相同。

注意事項：
   1、 溶液PC 在低溫運輸或者保存過程中可能會生成沉淀，如果有沉淀生成，請在37 ℃溶解再使用。
   2、 洗脫前，在55-60℃水浴預熱洗脫緩沖液EB（Buffer EB)。

保存溫度：該試劑盒在室溫條件下，可保存 12 個月，更長時間保存可置于 4℃。 若溶液產(chǎn)生沉淀，可在室溫下放置一段時間，或在 37℃水浴中預熱 10min，以溶解沉淀。

DNA Gel/PCR Purification Kit 產(chǎn)品包裝（A包裝）：

實驗步驟：

漂洗液 PW 在使用前按照試劑瓶所示加入 60 mL 無水乙醇，混合均勻。

1，
a，瓊脂糖凝膠產(chǎn)物純化：將切割的凝膠轉(zhuǎn)入干凈的離心管中，加入等體積的溶液 PC（如果凝膠重為 0.1 g，其體積可視為 100 μL，則加入100 μL PC 溶液），放入55-60℃水浴中，間斷搖晃混合，直至凝膠完全融化（約5-10min），放置使其冷卻至室溫。
b，PCR 產(chǎn)物純化：在 PCR 反應液或酶切反應液中加入 2 倍體的溶液 PC，充分混勻。純化小于200bp 的片段，加入 5 倍體積的溶液PC 到1 倍體積的PCR 反應液。

注意：
   100mg 凝膠塊需加入 100μL的溶液PC，確保加入不小于 1 倍體積的溶液PC；
   純化小于 200bp 的片段，加入 1 倍體積的異丙醇（100mg 凝膠塊或100μLPCR 反應液加入100μL異丙醇）。

2，轉(zhuǎn)移以上混合液（每次不超過700μL）至一個帶有收集管（Collection Tube）的吸附柱（Spin Column）中，室溫下，13,000 rpm 下離心1min，棄廢液，將吸附柱放回收集管中。
3，重復步驟2，直至剩余的混合液全部通過吸附柱。
4，加入350μL 漂洗液 PW(Buffer PW)至吸附柱中，室溫下13,000 rpm下離心 30s，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。
5，重復步驟4。
6，室溫下，13,000 rpm 下，將吸附柱開蓋離心 2min，除去殘留的乙醇。

注意：開蓋離心有利于乙醇的去除，乙醇的殘留將影響下游實驗，可以適當延長離心時間，并且離心后開蓋空氣中放置幾分鐘。

7，轉(zhuǎn)移吸附柱至一個新的1.5mL 收集管中，加入30-50μL 60℃預熱的洗脫緩沖液 EB（Buffer EB)或ddH2O 至吸附柱膜中央，室溫靜置 1min，13,000 rpm下離心 1min 以洗脫 DNA，如果想提高收獲量，將洗脫液加入到吸附柱中重新洗脫一次。

注意：洗脫體積不應小于30μl，體積過少影響回收效率。洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響。若后續(xù)做測序，需使用ddH2O做洗脫液，并保證其pH值在7.0-8.5范圍內(nèi)，pH值低于7.0會降低洗脫效率；且DNA產(chǎn)物應保存在-20℃，以防DNA 降解。DNA也可以用緩沖液(10mM Tris-Cl, pH8.0) 洗脫。為了提高DNA的回收量，可將離心得到的溶液重新加回離心吸附柱中，室溫放置2min，13,000rpm離心2min，將DNA溶液收集到離心管中。