產(chǎn)品名稱：DNA Gel/PCR Purification Kit
產(chǎn)品編號與包裝規(guī)格：
| 編號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 產(chǎn)品介紹 | 價(jià)格 |
| HKDK005-01A | DNA Gel/PCR Purification Kit | 50次 | DNA凝膠/PCR 純化試劑盒 | 223 |
產(chǎn)品描述：本試劑盒采用獨(dú)特的離心吸附柱，既能從 TAE 或 TBE 瓊脂糖凝膠中回收 DNA 片段，又能用于直接純化 PCR 產(chǎn)物。溶液PC 中含有 pH 指示劑，可根據(jù)顏色來判斷溶膠或 PCR 產(chǎn)物回收是否達(dá)到最佳狀態(tài)。使用本產(chǎn)品可回收 100 bp-20 kb 大小的DNA 片段，回收率可達(dá) 80%。使用本試劑盒回收的 DNA 可適用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、測序、文庫篩選、連接和轉(zhuǎn)化等實(shí)驗(yàn)。
使用建議：如果所提質(zhì)粒為低拷貝質(zhì)?；虼?10kb 的大質(zhì)粒，應(yīng)加大菌體使用量，使用5～10mL 過夜培養(yǎng)物，同時(shí)按照比例增加 P1、P2、P3 的用量，洗脫緩沖液EB 應(yīng)在65～70℃水浴預(yù)熱，在吸附和洗脫時(shí)可以適當(dāng)?shù)难娱L時(shí)間，以增加提取效率。其它步驟相同。
注意事項(xiàng)：
1、 溶液PC 在低溫運(yùn)輸或者保存過程中可能會生成沉淀，如果有沉淀生成，請?jiān)?7 ℃溶解再使用。
2、 洗脫前，在55-60℃水浴預(yù)熱洗脫緩沖液EB（Buffer EB)。
保存溫度：該試劑盒在室溫條件下，可保存 12 個(gè)月，更長時(shí)間保存可置于 4℃。 若溶液產(chǎn)生沉淀，可在室溫下放置一段時(shí)間，或在 37℃水浴中預(yù)熱 10min，以溶解沉淀。
DNA Gel/PCR Purification Kit 產(chǎn)品包裝（A包裝）：
| 產(chǎn)品組成 | 體積 |
| Buffer PC | 25mL |
| Buffer PW | 15mL |
| Buffer EB | 10mL |
| Spin Columns | 50 個(gè) |
| Collection Tubes | 50 個(gè) |
實(shí)驗(yàn)步驟：
漂洗液 PW 在使用前按照試劑瓶所示加入 60 mL 無水乙醇，混合均勻。
1，
a，瓊脂糖凝膠產(chǎn)物純化：將切割的凝膠轉(zhuǎn)入干凈的離心管中，加入等體積的溶液 PC（如果凝膠重為 0.1 g，其體積可視為 100 μL，則加入100 μL PC 溶液），放入55-60℃水浴中，間斷搖晃混合，直至凝膠完全融化（約5-10min），放置使其冷卻至室溫。
b，PCR 產(chǎn)物純化：在 PCR 反應(yīng)液或酶切反應(yīng)液中加入 2 倍體的溶液 PC，充分混勻。純化小于200bp 的片段，加入 5 倍體積的溶液PC 到1 倍體積的PCR 反應(yīng)液。
注意：
100mg 凝膠塊需加入 100μL的溶液PC，確保加入不小于 1 倍體積的溶液PC；
純化小于 200bp 的片段，加入 1 倍體積的異丙醇（100mg 凝膠塊或100μLPCR 反應(yīng)液加入100μL異丙醇）。
2，轉(zhuǎn)移以上混合液（每次不超過700μL）至一個(gè)帶有收集管（Collection Tube）的吸附柱（Spin Column）中，室溫下，13,000 rpm 下離心1min，棄廢液，將吸附柱放回收集管中。
3，重復(fù)步驟2，直至剩余的混合液全部通過吸附柱。
4，加入350μL 漂洗液 PW(Buffer PW)至吸附柱中，室溫下13,000 rpm下離心 30s，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。
5，重復(fù)步驟4。
6，室溫下，13,000 rpm 下，將吸附柱開蓋離心 2min，除去殘留的乙醇。
注意：開蓋離心有利于乙醇的去除，乙醇的殘留將影響下游實(shí)驗(yàn)，可以適當(dāng)延長離心時(shí)間，并且離心后開蓋空氣中放置幾分鐘。
7，轉(zhuǎn)移吸附柱至一個(gè)新的1.5mL 收集管中，加入30-50μL 60℃預(yù)熱的洗脫緩沖液 EB（Buffer EB)或ddH2O 至吸附柱膜中央，室溫靜置 1min，13,000 rpm下離心 1min 以洗脫 DNA，如果想提高收獲量，將洗脫液加入到吸附柱中重新洗脫一次。
注意：洗脫體積不應(yīng)小于30μl，體積過少影響回收效率。洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響。若后續(xù)做測序，需使用ddH2O做洗脫液，并保證其pH值在7.0-8.5范圍內(nèi)，pH值低于7.0會降低洗脫效率；且DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃，以防DNA 降解。DNA也可以用緩沖液(10mM Tris-Cl, pH8.0) 洗脫。為了提高DNA的回收量，可將離心得到的溶液重新加回離心吸附柱中，室溫放置2min，13,000rpm離心2min，將DNA溶液收集到離心管中。
