細(xì)胞培養(yǎng)常用耗材簡(jiǎn)介
發(fā)布時(shí)間：2024-01-17 瀏覽次數(shù)：697
貼壁培養(yǎng)和懸浮培養(yǎng)
在認(rèn)識(shí)細(xì)胞的“住所”之前，我們先了解下細(xì)胞的2D培養(yǎng)體系，目前主要有兩種基本的細(xì)胞培養(yǎng)體系，其中一種比較多的培養(yǎng)體系是使細(xì)胞在一定底物上單層生長(zhǎng) (即：貼壁培養(yǎng))，另一種是使細(xì)胞在培養(yǎng)基中自由漂浮生長(zhǎng) (懸浮培養(yǎng))。3D細(xì)胞培養(yǎng)體系以后進(jìn)行介紹。
貼壁細(xì)胞需要貼附在一個(gè)固相界面上才能生長(zhǎng)，而只有親水的固相界面，細(xì)胞才能貼附。像玻璃的表面是親水的，所以不需要做特殊處理，就可以用于貼壁細(xì)胞，但是由于玻璃的材質(zhì)易碎、重復(fù)使用比較麻煩、重復(fù)使用會(huì)增加污染概率等不足的地方，逐漸發(fā)展到現(xiàn)在選擇了PS（聚苯乙烯）替代，由于PS（聚苯乙烯）的表面是疏水的，所以這個(gè)固定界面必須經(jīng)過(guò)特殊處理（例如：中文名：TC處理，英文名：Tissue-culture treated），以便細(xì)胞粘附和伸展 (即：組織培養(yǎng)處理)。經(jīng)過(guò)表面的改性處理，適合貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)。而懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞，就不一定需要這樣經(jīng)過(guò)特殊處理過(guò)的器皿。但經(jīng)過(guò)表面的改性處理后的細(xì)胞培養(yǎng)容器等一般也適合懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)。
下面介紹細(xì)胞培養(yǎng)中所需要的一些耗材
01 細(xì)胞培養(yǎng)器皿
常見(jiàn)的有三種，細(xì)胞培養(yǎng)瓶（或稱(chēng)易用培養(yǎng)瓶）、細(xì)胞培養(yǎng)板、細(xì)胞培養(yǎng)皿。
無(wú)論是細(xì)胞培養(yǎng)器皿，必須要做到無(wú)DNA酶，無(wú)RNA酶，無(wú)熱原，無(wú)毒素認(rèn)證，無(wú)菌級(jí)別達(dá)10-6，材質(zhì)無(wú)生物污染融出物質(zhì)等要求。
除了常用的細(xì)胞培養(yǎng)瓶/板/皿之外，還有一些特殊的細(xì)胞培養(yǎng)容器或工具，比如：Transwell小室、細(xì)胞爬片、共聚焦小皿，像規(guī)?；?xì)胞培養(yǎng)耗材還有：多層培養(yǎng)瓶、細(xì)胞工廠、滾瓶、培養(yǎng)袋等。對(duì)這些特殊產(chǎn)品的應(yīng)用有興趣的小伙伴可以關(guān)注環(huán)凱公眾號(hào)，以后會(huì)在文中介紹。 以下是以Hela細(xì)胞為例給出的各培養(yǎng)器皿的可獲細(xì)胞數(shù)量，僅供參考。
02 離心管（無(wú)菌）
英文名稱(chēng)：centrifugal tube 或 centrifuge tube，細(xì)胞培養(yǎng)中，用戶(hù)分離細(xì)胞及其他溶液。離心管按照底部形狀，分為平底離心管和圓底離心管；按照蓋子閉合方式，分為壓蓋離心管和螺旋蓋離心管。常用于細(xì)胞培養(yǎng)的離心管主要是15ml和50ml的螺旋蓋尖底離心管。離心管必須要做到無(wú)DNA酶，無(wú)RNA酶，無(wú)熱原，無(wú)毒素認(rèn)證，無(wú)菌級(jí)別達(dá)10-6，材質(zhì)無(wú)生物污染融出物質(zhì)等要求。
03 移液管（無(wú)菌）
英文名稱(chēng)：transfer pipette，細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，往往需要進(jìn)行較大體積的液體操作，由于操作的簡(jiǎn)便性，各種規(guī)格的移液管幾乎成為細(xì)胞培養(yǎng)室的必備用品之一。
早期的移液管為玻璃制品，可以高溫高壓滅菌并反復(fù)使用，但是由于玻璃制品的易碎性以及反復(fù)滅菌潛在的風(fēng)險(xiǎn)，目前許多細(xì)胞培養(yǎng)室已經(jīng)基本放棄使用玻璃制的移液管，而采用更加方便、安全、準(zhǔn)確的一次性塑料制移液管。無(wú)論是哪種移液管，必須要做到無(wú)DNA酶，無(wú)RNA酶，無(wú)熱原，無(wú)毒素認(rèn)證，材質(zhì)無(wú)生物污染融出物質(zhì)等要求。
配合移液管使用從而實(shí)現(xiàn)較大體積液體操作的常用工具是洗耳球或者電動(dòng)移液管移液器。如今絕大多數(shù)用戶(hù)使用的是電動(dòng)移液管移液器，但電動(dòng)移液器是采用手動(dòng)控制吸、排液操作，在排液末端，由于壓力過(guò)小的原因，往往會(huì)有部分液體不能徹底排凈，同時(shí)由于其吸取液體量并不能預(yù)先設(shè)定，所以，操作準(zhǔn)確性往往較差，因此，移液管更適用于精確度要求不高的大體積液體操作，屬于常量移液器。
04 細(xì)胞凍存管（無(wú)菌）
英文名稱(chēng)：ultra-low temperature preservation tube，用于細(xì)胞的低溫運(yùn)輸和儲(chǔ)存的容器。常規(guī)的凍存管規(guī)格1.5ml、1.8ml、2.0ml、5.0ml，根據(jù)樣本量及類(lèi)型，還可以選擇凍存袋等。凍存管根據(jù)蓋子的設(shè)計(jì)，分為外旋凍存管和內(nèi)旋凍存管。
為了樣本庫(kù)更嚴(yán)格的質(zhì)控管理，有些廠家生產(chǎn)了印有二維碼的2D凍存管。無(wú)論是哪種凍存容器，必須要做到無(wú)DNA酶，無(wú)RNA酶，無(wú)熱原，無(wú)毒素認(rèn)證，無(wú)菌級(jí)別達(dá)10-6，材質(zhì)無(wú)生物污染融出物質(zhì)等要求。
05 一次性細(xì)胞刮刀/鏟刀
英文名稱(chēng)：Cell scraper，通常采用優(yōu)質(zhì)的聚乙烯材料加工成型，具有比較好的韌性，保證在收集細(xì)胞過(guò)程中保護(hù)細(xì)胞，收集細(xì)胞的輔助工具。
06 除菌過(guò)濾器（無(wú)菌）
用于制備培養(yǎng)基或者與細(xì)胞接觸的相關(guān)試劑，孔徑通常為0.22μm或0.1μm。根據(jù)待過(guò)濾樣品的體積，可以選擇不同的過(guò)濾器材，比如針頭濾器、頂式濾器等。
07 吸頭（無(wú)菌）
最常用的一次性的消耗品，用于任何分子生物學(xué)和基因?qū)W研究的應(yīng)用，其在移液器和樣品之間有效的形成保護(hù)結(jié)構(gòu)，保證吸樣和分樣的安全性。容量范圍通常從0.1 — 5000ml。用于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的吸頭，必須要做到無(wú)DNA酶，無(wú)RNA酶，無(wú)熱原，無(wú)毒素認(rèn)證，材質(zhì)無(wú)生物污染融出物質(zhì)等要求。
08 其他耗材
細(xì)胞篩網(wǎng)、凍存盒（用于收納和管理凍存管）、酒精燈、手套、無(wú)菌實(shí)驗(yàn)服、消毒水、液體儲(chǔ)存瓶(用于儲(chǔ)存各種配制好的培養(yǎng)液、血清等液體，常用規(guī)格有 500 ml、250 ml、100 ml 等)。細(xì)胞培養(yǎng)、凍存、操作耗材的正確與細(xì)胞生長(zhǎng)狀況的好壞密切相關(guān)，所以我們?cè)谶x用細(xì)胞培養(yǎng)的耗材時(shí)，首要條件是無(wú)菌，尤其是培養(yǎng)和涉及低溫操作的耗材時(shí)，還要考慮其低溫耐受性以及安全性等。
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