常用細(xì)胞增殖與毒性檢?測方法介紹及其比較
發(fā)布時(shí)間：2023-03-14 瀏覽次數(shù)：178
幾種細(xì)胞增殖與毒性檢測方法
01 MTT法
MTT：一種黃色染料，化學(xué)名：3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽，商品名：噻唑藍(lán)。檢測原理 為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲臜(Formazan )并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。二甲基亞礬（DMSO）能溶解細(xì)胞中的甲臜，用酶聯(lián)免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。該方法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及腫瘤放射敏感性測定等。
優(yōu)點(diǎn)：靈敏度高、經(jīng)濟(jì)。
缺點(diǎn)：由于MTT經(jīng)還原所產(chǎn)生的甲臜產(chǎn)物不溶于水，需被溶解后才能檢測。這不僅使工作量增加，也會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性產(chǎn)生影響，而且溶解甲臜的有機(jī)溶劑對(duì)實(shí)驗(yàn)者也有損害。
02 XTT法
XTT：化學(xué)名：2,3- bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-5-[(phenylamino)carbonyl]-2H-tetrazolium hydroxide，作為線粒體脫氫酶的作用底物，被活細(xì)胞還原成水溶性的橙黃色甲臜產(chǎn)物。當(dāng)XTT與電子偶合劑（例如PMS )聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，其所產(chǎn)生的水溶性的甲產(chǎn)物的吸光度與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。
優(yōu)點(diǎn)：
1. 使用方便，省去了洗滌細(xì)胞；
2. 檢測快速；
3. 靈敏度高，甚至可以測定較低細(xì)胞密度；
4. 重復(fù)性優(yōu)于MTT。
缺點(diǎn)：XTT水溶液不穩(wěn)定，需要低溫保存或現(xiàn)配現(xiàn)用。
03 WST-1法
WST-1是一種類似于MTT的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成水溶性橙黃色的甲臜產(chǎn)物( Formazan )。細(xì)胞增殖越多越快，則顏色越深；細(xì)胞毒性越大，則顏色越淺。WST-1是MTT的一種升級(jí)替代產(chǎn)品。
優(yōu)點(diǎn)：
1. 使用方便，省去了洗滌細(xì)胞，不需要放射性同位素和有機(jī)溶劑；
2. 比XTT和MTT更加穩(wěn)定，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更加穩(wěn)定；
3. 與MTT、XTT等相比，線性范圍更寬，靈敏度更高。
04 CCK-8法
CCK- 8全稱為Cell Counting Kit-8，試劑中含有WST-8；化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪硫酸二甲酯( 1-Methoxy PMS )的作用下被細(xì)胞線粒體中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲臜產(chǎn)物( Formazan )。生成的甲臜產(chǎn)物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。用酶聯(lián)免疫檢測儀在450nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。該方法已被廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞增殖試驗(yàn)、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及藥敏試驗(yàn)等。
優(yōu)點(diǎn)：
1. 使用方便，省去了洗滌細(xì)胞，不需要放射性同位素和有機(jī)溶劑；
2. 檢測快速；
3. 靈敏度高，優(yōu)于WST-1；
4. 重復(fù)性優(yōu)于MTT；
5. 對(duì)細(xì)胞毒性小；
6. 試劑穩(wěn)定性很好，優(yōu)于WST-1；
7. 為1瓶溶液，毋需預(yù)制，即開即用。
缺點(diǎn)：
1. 與MTT相比，CCK-8和XTT的價(jià)格比較貴；
2. CCK-8試劑的顏色為淡紅色，與含酚紅的培養(yǎng)基顏色接近，不注意的話容易產(chǎn)生漏加或多加。
表1：幾種細(xì)胞增殖/毒性檢測方法的比較
| 檢測方法 | MTT法 | XTT法 | WST-1法 | CCK-8法 |
| 甲臜產(chǎn)物的 水溶性 | 差 （需加有機(jī)溶劑溶解 再檢測） | 好 | 好 | 好 |
| 適用細(xì)胞 | 貼壁 | 貼壁或懸浮 | 貼壁或懸浮 | 貼壁或懸浮 |
| 產(chǎn)品性狀 | 粉末 | 2瓶溶液 | 溶液 | 1瓶溶液 |
| 使用方法 | 現(xiàn)配現(xiàn)用 | 現(xiàn)配現(xiàn)用 | 即開即用 | 即開即用 |
| 檢測靈敏度 | 高 | 很高 | 很高 | 高 |
| 檢測時(shí)間 | 較長 | 較短 | 較短 | 最短 |
| 檢測波長 | 560-600nm | 420-480nm | 420-480nm | 430-490nm |
| 細(xì)胞毒性 | 高，細(xì)胞形態(tài)完全消失 | 很低，細(xì)胞形態(tài)不變 | 很低，細(xì)胞形態(tài)不變 | 很低，細(xì)胞形態(tài)不變 |
| 試劑穩(wěn)定性 | 一般 | 較差 | 一般 | 很好 |
| 批量樣品檢測 | 可以 | 非常適合 | 非常適合 | 非常適合 |
| 便捷程度 | 一般 | 便捷 | 便捷 | 非常便捷 |
普遍認(rèn)為，CCK-8是操作更簡單、數(shù)據(jù)更穩(wěn)定、靈敏度也較高的細(xì)胞增殖與毒性檢測方法。CCK-8實(shí)驗(yàn)過程簡單總結(jié)為配置細(xì)胞懸液、加入待測物質(zhì)、待測物質(zhì)與細(xì)胞共同孵育一定時(shí)間、加入CCK-8、測定吸光度五步。但其中仍有需要注意的地方，值得探討學(xué)習(xí)。
來源：“金沙生物”公眾號(hào)
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