中國(guó)工程院食品安全院士團(tuán)隊(duì)

科研成果轉(zhuǎn)化平臺(tái)

在醫(yī)藥行業(yè)中，昆蟲細(xì)胞系經(jīng)常用于生產(chǎn)重組蛋白，其生產(chǎn)過(guò)程需要對(duì)重組昆蟲病毒進(jìn)行遺傳工程操作。重組病毒可以根據(jù)病毒量化過(guò)程用于實(shí)驗(yàn)中。然而，目前的病毒定量方法受技術(shù)和經(jīng)驗(yàn)要求，持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)且復(fù)雜。Kyu-Seek Kim等人為解決這一問(wèn)題，設(shè)計(jì)了一種可用于快速和便捷地量化昆蟲病毒的新型轉(zhuǎn)基因Sf9細(xì)胞系。

Sf9-QE細(xì)胞系

Sf9-QE細(xì)胞系通過(guò)引入熒光基因，能夠在病毒感染后迅速發(fā)出高熒光，從而簡(jiǎn)化了病毒量化過(guò)程。與傳統(tǒng)的昆蟲細(xì)胞系相比，使用Sf9-QE細(xì)胞系可以將病毒量化的時(shí)間縮短4至6天。該細(xì)胞系的平均直徑約為16微米，比普通Sf9細(xì)胞小2微米，但其增殖速率卻是普通Sf9細(xì)胞的1.6倍。研究還發(fā)現(xiàn)，Sf9-QE細(xì)胞系在至少100次傳代后仍能保持其特性，表明其穩(wěn)定性相對(duì)較高。此外，熒光光度法也方便了病毒感染的定量。

Kyu-Seek Kim等人在文章中還詳細(xì)描述了Sf9-QE細(xì)胞系的構(gòu)建過(guò)程，包括使用piggyBac系統(tǒng)將目標(biāo)基因片段轉(zhuǎn)化到Sf9細(xì)胞基因組中，以及通過(guò)抗生素篩選和多次傳代來(lái)選擇表達(dá)EGFP（增強(qiáng)型綠色熒光蛋白）的轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系。此外，研究還評(píng)估了Sf9-QE細(xì)胞系在病毒感染后的熒光強(qiáng)度，并與其他細(xì)胞系進(jìn)行了比較。

圖1 不同Sf9細(xì)胞株對(duì)病毒感染的熒光表達(dá)水平比較

如圖1所示，比較了20株Sf9-T細(xì)胞株對(duì)病毒感染的熒光表達(dá)水平。結(jié)果顯示，在所有Sf9-T細(xì)胞系中，包括作為對(duì)照的Sf9-ET，在每過(guò)3天就能觀察到清晰的熒光表達(dá)。值得注意的是，Sf9-T-20細(xì)胞在每過(guò)1天就能觀察到熒光表達(dá)，并在4天達(dá)到最大值，此時(shí)熒光強(qiáng)度大約是Sf9-ET細(xì)胞的5倍。因此，選擇熒光最快速、最強(qiáng)烈的Sf9-T-20細(xì)胞系作為最終的轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系，命名為Sf9-QE（“QE”代表quick and easy）。

關(guān)鍵發(fā)現(xiàn)：
— 使用piggyBac系統(tǒng)將目標(biāo)基因片段轉(zhuǎn)化到Sf9細(xì)胞基因組；
— 通過(guò)抗生素篩選和多次傳代來(lái)選擇表達(dá)EGFP（增強(qiáng)型綠色熒光蛋白）的轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系；
— 通過(guò)引入熒光基因，能夠在病毒感染后迅速發(fā)出高熒光，從而簡(jiǎn)化病毒定量過(guò)程。

結(jié)論：總的來(lái)說(shuō)，Sf9-QE細(xì)胞系的開(kāi)發(fā)為醫(yī)學(xué)和制藥行業(yè)中重組蛋白的生產(chǎn)和研究提供了一個(gè)有用的工具，有望顯著提高病毒量化的效率和準(zhǔn)確性，從而對(duì)人類健康和醫(yī)療保健做出貢獻(xiàn)。

引用文獻(xiàn)：Kyu-Seek Kim, Jun-Su Bae, Hyuk-Jin Moon, Do-Young Kim, Soo-Dong Woo. A Novel Transgenic Sf9 Cell Line for Quick and Easy Virus Quantification[J].Insects,2024,Vol.15(9): 686

來(lái)源：微生物安全與健康網(wǎng)，作者~梁冬雪。