副溶血性弧菌毒力的多重qPCR檢測(cè)方案
發(fā)布時(shí)間：2024-09-03 瀏覽次數(shù)：26
副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus, Vp)是一種嗜鹽的革蘭氏陰性菌，廣泛分布于世界各地的沿海/海洋水域，被認(rèn)為是魚類消費(fèi)中最常見的食物中毒劑。因而，在水產(chǎn)品中監(jiān)測(cè)致病性Vp的存在及水平至關(guān)重要?；诖耍狙芯拷⒘艘环N多重實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)，用于水和食品中的致病性Vp的檢測(cè)(tdh/trh1/trh2)，其結(jié)果與ISO 21872-1：2007進(jìn)行比較顯示：tdh/trh1/trh2的檢測(cè)限分別為6 CFU/25 g;11 CFU/25g;8 CFU/25 g，且相較于ISO標(biāo)準(zhǔn)方法所需的3天時(shí)間(至少)，本研究耗時(shí)大大縮短，僅需24 h。
弧菌屬的致病性物種是一個(gè)相當(dāng)大的人類公共衛(wèi)生威脅，霍亂弧菌、副溶血性弧菌和創(chuàng)傷弧菌是其中最重要的病原體。其中，Vp是一種嗜鹽的革蘭氏陰性菌，在20世紀(jì)50年代首次被描述，廣泛分布于世界各地的沿海/海洋水域，常從海產(chǎn)品中分離出來(lái)：魚類、甲殼類和軟體類，并被認(rèn)為是魚類消費(fèi)中最常見的食物中毒劑。盡管環(huán)境和食品樣本中存在副溶血性弧菌，但致病菌株存在率卻很低，僅占總種群的0.3-3%。不過(guò)，檢測(cè)致病菌株的重要性正在逐年增長(zhǎng)。然而，傳統(tǒng)的Vp 致病性鑒定是通過(guò)KP實(shí)驗(yàn)實(shí)現(xiàn)的，這種致力于檢測(cè)TDH毒株，不能檢測(cè)TRH毒株，不利于食品安全控制和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。基于PCR的分子檢測(cè)方法可以較為輕易地實(shí)現(xiàn)毒株的鑒定，其中，qPCR額外引入一個(gè)特異性熒光探針(針對(duì)引物位點(diǎn)內(nèi)部的基因特異性序列)，提供了更高程度的特異性?；诖?，本研究建立了一種多重qPCR方案，該方法可以實(shí)現(xiàn)致病性Vp(tdh和trh)的快速檢測(cè)。在一次qPCR反應(yīng)中，通過(guò)使用兩組不同的探針即可檢測(cè)tdh、trh1、trh2，這是少數(shù)幾個(gè)在單一反應(yīng)中檢測(cè)不同形式的trh基因的致病性Vp的研究之一，以往的研究只集中在物種水平上的鑒定。
文章的工作內(nèi)容可以概括為：1)比較細(xì)菌培養(yǎng)基質(zhì);2)比較DNA提取方法;3)建立多重qPCR檢測(cè)方法并與ISO標(biāo)準(zhǔn)比較。在評(píng)估多重qPCR反應(yīng)體系時(shí)，作者引入了一個(gè)內(nèi)部控制對(duì)照以評(píng)估樣品基質(zhì)對(duì)PCR反應(yīng)的抑制性，并利用模擬樣本和天然樣本評(píng)估了方法的靈敏度，檢測(cè)限?？偟膩?lái)說(shuō)，所開發(fā)的qPCR方法不僅達(dá)到了傳統(tǒng)微生物方法相同的檢測(cè)限，達(dá)到了相同的靈敏度(94%)，具有高特異性(100%)，而且明顯縮短了反應(yīng)時(shí)間(24 h)。檢測(cè)時(shí)間短是至關(guān)重要的，因?yàn)橐恍┮妆患?xì)菌污染的產(chǎn)品是新鮮食用的，并不能長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存。不過(guò)，研究也有其不足之處，并未將Vp種水平檢測(cè)納入其中。
原文DOI：10.1016/j.foodcont.2011.09.015
來(lái)源：微生物安全與健康網(wǎng)，作者~鄒晶晶
